【摘 要】 目的：采用高效液相色谱法测定针叶樱桃提取物中VB1和VB2的含量，优化样品制备方法及HPLC色谱条件，并将该方法用于针叶樱桃提取物中VB1和VB2的含量测定。方法：采用HPLC法，色谱柱Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm，5?m），柱温为40℃，进样体积20?L，流速1.0mL/min，检测波长280nm，流动相组成为乙腈和5mmol/L庚烷磺酸钠溶液，采用等度洗脱模式。结果：方法学考察表明，VB1和VB2分别在0.089?g/mL-0.89?g/mL和0.086?g/mL-0.86?g/mL范围内线性关系良好，方法的精密度、重复性均符合要求，平均回收率为99.5%～101.1%。结论：该方法操作简单、精密度、重复性良好，能够用于检测针叶樱桃提取物中VB1和VB2的含量检测。

【关键词】 针叶樱桃提取物 VB1 VB2 高效液相色谱

前 言

针叶樱桃，俗称西印度樱桃（West Indies cherry），原产地在热带美洲，针叶樱桃中含有蛋白质、糖、维生素A、B1、B2、维生素C，尼克酸、钙、磷、铁等多种维生素及矿物质。

针叶樱桃提取物是以优良的针叶樱桃作为提取原料，采取喷雾干燥技术加工而成，很大限度的维持了针叶樱桃自身的原味，并且富含多种维生素和酸类物质，性状：棕色粉末，溶解度：≥99.9%，针叶樱桃中因为维生素C含量很高而得到了广泛的应用，但其中所含微量B族元素维生素B1和维生素B2对人身体也有很大的益处。

维生素B1在体内都是以辅酶形式参与糖的分解，对神经系统有保护的作用，还可以帮助肠胃蠕动，增加食欲。

维生素B2参与着各种氧化反应，促进发育和细胞的再次生长，对口腔、唇部、舌头以及皮肤的一些炎症反应可以起到预防和消除的作用，还可以缓解的眼睛疲劳。

目前，尚未见有关对针叶樱桃中的B族维生素含量进行研究分析的文献报道，鉴于此，本研究对针叶樱桃中的B族维生素的含量进行了测定，建立一种测定针叶樱桃中维生素B1和维生素B2的方法对于保证针叶樱桃质量具有重要意义。

1.材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验原料

针叶樱桃提取物，产品厂家：陕西森弗公司。

1.1.2主要试剂

维生素B1 标品（北京世纪奥科生物技术有限公司）、维生素B2标品（北京世纪奥科生物技术有限公司）、乙腈（Tedia.USA）、甲醇（DikmaPure.USA）甲酸（重慶川东化工（集团）有限公司）、纯净水（杭州娃哈哈百力食品有限公司）

1.1.3 主要实验仪器

高效液相色谱仪LC-20AT日本岛津公司、数控超声波清洗器KQ5200DB昆山市超声仪器有限公司、电子天平AUW-120D日本岛津公司、紫外可见光光谱仪UV2700日本岛津公司

1.2 实验方法

1.2.1 样品前处理

称取针叶樱桃提取物约500mg精密称定，置于100ml容量瓶加入1%甲酸溶液定容至容量瓶刻度线，超声波15min，经0.45μm的滤膜过滤既得。

1.2.2对照品溶液的配制

称取VB1和VB2标准品约10mg，精密称定，置于10mL容量瓶中，加10mL1%甲酸溶解，即得。

1.2.3 色谱检测条件

色谱柱Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm×5?m），流动相为：乙腈和5mmol/L庚烷磺酸钠溶液，等浓度洗脱，柱温：40℃;进样体积20?l;流速1ml/min;检测器：氘灯，检测波长280nm。维生素B1标准品在17.9min出峰;维生素B2标准品在16.5min出峰。

1.2.4 维生素B1、维生素B2标准曲线的绘制

精密称取VB2标准品0.0089g，用1%的甲酸溶液配成浓度为0.89?g/ml的标准储备液;用0.89?g/ml的储备液配制成质量浓度为0.089?g/ml、0.178?g/ml、0.356?g/ml、0.534?g/ml、0.712?g/ml、0.89?g/m的系列标准溶液，得到VB2的校正曲线计算公式为y=59252x﹢5261.7，相关系数R2=0.9922。精密称取VB1标准品0.0086g，用1%的甲酸溶液配成浓度为0.86?g/ml的标准储备液，用0.86?g/ml的储备液配制成质量浓度为0.086?g/ml、0.172?g/ml、0.344?g/ml、0.516?g/ml、0.688?g/ml、0.86?g/m的系列标准溶液。得到VB1的校正曲线计算公式为y=220936x-9557.7，相关系数R2=0.9921。

2 结论与讨论

2.1 溶剂的选择

维生素B2微溶于水，易溶于酸性物质在强酸溶液中稳定。维生素B1在酸性溶液中很稳定，在碱性溶液中不稳定，易被氧化和受热破坏。实验证明维生素B1和维生素B2都易溶于酸性溶液，因此采用酸性溶液作为提取溶剂，在酸性溶液筛选中分别采用磷酸溶液、甲酸溶液来溶解维生素B1和维生素B2，实验发现采用磷酸溶液维生素B2比较稳定，但维生素B1虽易溶解但出峰峰形不好，而采用1%甲酸溶液维生素B1和维生素B2都易溶解且出峰峰形美观，故最终采用1%甲酸溶液做提取溶剂。

2.2波长的选择

在进行探究液相色谱条件之前，先将配置好的对照品做一个最大吸收波长的扫描，在190nm-400nm处扫描发现维生素B1和维生素B2标准品溶液分别在243nm处和268nm处有最大吸收波长。综合考虑检测灵敏度、机体吸收、杂质干扰等因素，最终选择280nm作为测定波长，在此波长下维生素B1和维生素B2分离效果好、基线稳定、灵敏度高、稳定性好。

2.3流动相的选择

2种维生素虽同属水溶性维生素，但是化学结构并不相关，理化性质与色谱行为差异大，本研究分别对甲醇-水，0.1%甲酸-乙腈，离子对试剂-乙腈系统的进行了考察，发现在甲醇-水系统下维生素B2难以分离，在0.1%甲酸-乙腈系统下维生素B2峰形不好，干扰大。因此，考虑离子对试剂作为流动相，在离子对试剂选择上，从戊烷、己烷、庚烷、辛烷的碳链长度和保留程度进行分析，保留时间越长，分离效果越好。通过试验表明，使用庚烷磺酸钠时维生素B2分离度良好，同时，离子对试剂浓度增加保留时间也增加，庚烷磺酸钠的理想的浓度为0.005mol/L，在此浓度下维生素B2能达到很好的分离效果，同时也较少对液相系统和色谱柱的损害，能达到较好的基线分离，维生素B2出峰时间合适，峰形较好，干扰少，最终选择5mmol/L庚烷磺酸钠溶液-乙腈为本实验流动相。

2.4精密度

取维生素B1和维生素B2的标准样品溶液重复进样6次，结果测得维生素B1的进样RSD为0.8%;维生素B2的进样RSD为0.78%，符合仪器精密度分析要求

2.5加样回收率

精密称取同一批已知含量的针叶樱桃提取物样品，精密加入浓度为1mg/mL 的维生素B1和维生素B2贮备液适量，按4.2.1项下制备方法供试液共6份，进样分析，由测得量与加入量计算回收率，结果维生素B1的加样回收率在98.0 %～101.4%之间，平均加样回收率为99.5%，维生素B2的加样回收率在100.0 %～102.0%之间，平均加样回收率为101.1%，表明方法准确度较好，符合要求。

2.7样品的含量测定

称取针叶樱桃提取物约1.0g，精密称定。按4.2.1方法制备供试品溶液，进样20μL，记录样品峰面积，以对照品峰面积做对照，利用外标法计算VB1和VB2的含量。计算得出针叶樱桃提取物中VB1的含量为2.72mg/g，VB2的含量为2.98mg/g。

2.8 结论

2.8.1 主要结论

1.最佳色谱条件为：色谱柱Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm×5?m），柱温：40℃常温;进样体积20?l;流速1mL/min;检测波长280nm。流动相A：5mmol/L庚烷磺酸钠溶液，流动相B：乙腈;等浓度洗脱。

2.在本研究所建立的色谱条件下，维生素B1的加样回收率在98.0 %～101.4%之間，平均加样回收率为99.5%，维生素B2的加样回收率在100.0 %～102.0%之间，平均加样回收率为101.1%，表明方法准确度较好，符合要求。

3.本研究所测针叶樱桃提取物中B族维生素的含量为2.72mg/g，维生素B2的含量为2.98mg/g。

综上结论，本研究找出一种能快速、有效的提取针叶樱桃提取物中维生素B1和维生素B2的方法并能准确的对其含量进行定量分析的HPLC方法。

作者简介：徐菁、女、汉族、籍贯：贵州省贵阳市、学历研究生、就读于贵阳学院、专业食品工程