王梅林 牛精铃 金若其 徐莹莹 蔡晶晶 陈群力

（河南科技大学医学院，洛阳 471023）

小G蛋白是一类广泛存在于真核生物中的单体GTP结合蛋白，分子量为20-40 kD。小G蛋白家族成员数目庞大，超过150多个，根据其序列结构特征，可被分为5个主要的亚家族：Ras、Rho、Rab、Arf和Ran［1-2］。RhoB基因属于Rho亚家族，该亚家族蛋白在细胞骨架重组、基因表达及细胞周期等的调控中起到重要作用［3］。

RhoB与其同家族成员RhoA和RhoC的氨基酸序列同源性高达86%，生物学功能也有重合，如RhoA、RhoB和RhoC协同调控细胞骨架运动［4-5］，但更多的证据显示，RhoB具有许多独特于RhoA和RhoC的性质和功能。例如，RhoA和RhoC在细胞中为组成性表达，而RhoB则表现为诱导型表达［6］。抗癌药物处理（如顺铂、洛伐他汀）、紫外线照射、EGF或PDGF刺激等均可使RhoB的表达水平迅速上调［7-11］。又如RhoA和RhoC均可促进细胞增殖，而RhoB具有促进细胞凋亡的功能［12-13］。

RhoB在不同癌症的发生发展过程中表现出截然不同的功能。例如，在恶性胶质瘤、非小细胞肺癌和前列腺癌等肿瘤中的相关研究显示，其具有原癌基因的功能，可以促进肿瘤细胞的生长或迁移［14-16］。而在肾细胞癌和胰腺癌等癌症中，RhoB表现出抑癌基因的性质，其蛋白表达水平呈下降趋势［17-18］。因此，深入研究RhoB蛋白的生理功能尤其是在癌症发展进程中的功能具有十分重要的意义。本实验旨在扩增人RhoB基因的ORF序列，构建获得真核表达质粒Flag-RhoB，并研究所构建质粒在真核细胞的表达情况和细胞亚定位，旨为进一步研究RhoB蛋白的功能奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料 人乳腺癌MCF7细胞、宫颈癌HeLa细胞、结直肠癌HCT116细胞、水貂肺上皮细胞Mv.1.Lu细胞、菌株DH5α为本实验室保存；……