林小芳

摘要：以爱玉的叶片为材料，对CTAB分离总DNA的方法进行了改进，即在提取液中加入β-巯基乙醇、不同的PVP.结果表明：选用爱玉的嫩叶为材料及提取液中加入2%PVP，可有效地去除杂质，防止材料褐化，获得的DNA样品OD260nm/OD280nm比值为1.8左右，质量好且产率较高，电泳检测表明提取的DNA的完整性较好，能基本满足后续的PCR分析及限制性内切酶酶切等分子操作的要求.

关键词：爱玉;DNA;嫩叶;PVP

爱玉（Ficus awkeotsang Makino）是桑科榕属的多年生木质藤本植物，分布于我国福建、浙江南部和台湾等地区。由于爱玉野生资源匮乏以及人工栽培的特殊性，爱玉瘦果供不应求，价格居高不下。台湾自1985年开始人工栽培研究[1] ，20世纪90年代初爱玉作为名特优果树引种大陆，并已推广栽培。

根据爱玉叶片的上述特性，本实验打算在CTAB法提取DNA的基础上进行改良，以获得高纯度的可用于PCR分析、分子杂交及限制性内切酶酶切等操作的基因组DNA，以期为今后爱玉分子生物学研究建立了良好的实验基础。

1材料与方法

1.1材料

供试材料为爱玉，采自宁德市蕉城区，多株混合取样，取新鲜、无病斑的叶片组织，放冰盒中带回实验室，双蒸水洗涤晾干、去除主脉，立即用液氮速冻研磨成干粉，装入50ml离心管中，放-20℃保存备用。

1.2主要试剂及仪器

1.2.1试剂Tris、EDTA、CTAB、β-巯基乙醇、平衡酚、琼脂糖均购自北京Solarbio公司。HCl、NaCl、NaAc、氯仿、异戊醇、异丙醇、乙醇等均购自国药集团化学试剂有限公司。

1.2.2主要仪器 3-18K型高速冷冻离心机（德国SIGMA）、DYY-6C型电泳仪（北京六一）、DYCP-31E型电泳槽（北京六一）、1-14型台式小型高速离心机（Sigma）、T6新世纪型紫外可见分光光度计（北京普析）、紫外ZF型透射分析仪（上海嘉鹏）、MILLI-QReference超纯水器（美国MILLIPORE）。……