常 青

（濮阳职业技术学院，河南濮阳 457000）

家禽胚胎发育是一个外部过程，鸡胚发育依赖于鸡蛋内的营养物质，这些营养物质在21 d孵化期为胚胎提供代谢所需的能量和其他营养素（王凤华等，2007）。氧气是唯一一种不从鸡蛋中提取的营养物质，因此，鸡蛋的营养成分决定鸡胚孵化的成败。在胚胎生长的第一周，葡萄糖是主要的能量来源，而大部分碳水化合物如葡萄糖在孵化的第一周被利用。蛋黄中的脂肪酸是孵化后期的主要能量来源，卵黄营养物质大量动员进入胚胎，并在孵化过程中得到利用（李金峰，2014）。胚胎利用卵黄营养物质的能力受有氧代谢的限制，直到鸡胚开始肺呼吸（Moran，2007）。因此，胚胎逐渐降低脂肪代谢，增加糖原代谢，胚胎肝脏和肌肉中储存的糖原是孵化过程中的主要能量来源。但在孵化的这一阶段，为了满足孵化过程的高能量需求，糖原被大量利用，因此，在孵化结束时，胚胎中的糖原储备显著减少。鸡胚在孵化过程中对能量缺乏非常敏感，可能导致孵化能力较弱，在更严重的情况下可能导致胚胎死亡。因此，能源供应是小鸡能否正常出壳的一个限制因素。提高胚胎中的糖原储备是孵化过程对能量需求的关键。影响胚胎从有氧代谢向厌氧代谢转变和糖原储备平衡的因素包括孵化后期的温度，孵育期结束时温度的升高会导致出壳鸡只质量差，蛋黄残留量大，胚胎中蛋白质沉积量低，糖原利用率高，孵化发育和孵育期缩短（Lourens等，2007）。此外，卵黄囊膜对孵化过程中脂质和蛋白质的吸收有影响，如温度升高或氧气水平降低时会导致胚胎死亡率提高（Powell等，2004）。因此，本研究探讨了在体外注射碳酸化合物对鸡胚孵化温度升高的改善作用，同时评估其对鸡胚孵化后期孵化特性和糖原状态的影响。

1 材料与方法

1.1 试验设计 本研究开展了两个试验，试验1选择了来自29周龄肉种鸡的800枚种蛋，鸡蛋被编号后分别称重，按照均重一致原则进行分组。鸡蛋放置于孵化箱中，孵化温度为37.5℃，相对湿度55%，每隔2 h翻蛋一次，孵化16 d时照蛋检查，移除未受精的鸡胚和死亡胚胎。检查后，将其中的672个鸡蛋平均分配到56个重复中，每个重复含12个相同重量的鸡蛋。在孵育温度为37.5℃（对照组）和38.5℃（高温），将各重复随机分为2组，每组28个重复。孵化结束后，对照组留在上述培养箱中，高温组放置在另一个相同的培养箱中。恒温箱的相对湿度设置为55%。孵化至17.5 d对鸡胚体外注射碳水化合物，对照组分为正对照组（不注射）、负对照组（注射生理盐水），处理组分别对鸡胚注射 50、100、150、200和 250 mg碳水化合物（购自Sigma-Aldrich公司）。

1.2 样品收集与测定 孵化第19天清晨，将鸡胚转移到孵化盘的不同部位，以便在孵化时鉴定雏鸡。孵化托盘被分成单独的孵化网格，两个孵育箱的孵化温度分别设置在37℃和38℃，分别作为对照组和高温组，相对湿度65%，孵育至21 d结束。此时，统计未孵化的蛋与活的或死的小鸡以及死亡的胚胎。每12 h记录一次孵化时间，孵化444～504 h间隔12 h观察雏鸡，孵化重量记录至最近0.1 g。在孵化结束时，从每个实验处理中随机选择6只雏鸡，测定雏鸡体重，取其肝脏和胸肌进行称重。肝脏和胸肌样品采集后立即冷冻于液氮中，-80℃保存，进行糖原测定。取肝脏和胸肌样品0.25 g加入8%高氯酸1 mL，在冰中匀浆 1 min，4℃下 14000 g离心 30 min，取上清，加入石油醚1 mL，混合后去除石油醚馏分，将底层样品转移到新的管中测定糖原。糖原的测定采用碘-碘化钾法，在460 nm分光光度计比色法。

1.3 数据统计与分析 试验数据用SPSS软件进行单因素方差分析，组间均值的差异采用Ducan’s法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P＜0.05表示组间均值存在显著差异。

2 结果与分析

2.1 种蛋孵化率 胚胎注射碳水化合物和高温对种蛋孵化的影响结果见表1。结果显示，胚胎注射 50、100、150、200和 250 mg碳水化合物和对照组对胚胎孵化率、胚胎后期死亡率、活胚胎移植率和死胚胎移植率的影响均无显著差异（P＞0.05）。胚胎注射200和250 mg碳水化合物较50 mg碳水化合物组显著降低了胚胎的孵化时间（P＜0.05）。正对照、负对照组和其他组对胚胎的孵化指标均无显著影响（P＞0.05）。孵化温度和两个试验处理对各指标无显著影响（P＞0.05）。

表1 胚胎注射碳水化合物对高温下 鸡蛋孵化率的影响

2.2 种蛋孵化和仔鸡出壳重量 胚胎注射碳水化合物对高温下鸡蛋孵化重量和出壳小鸡重量的影响见表2。对照组与各处理组以及孵化温度、两个试验处理对孵化蛋重无显著影响（P＞0.05）。胚胎注射 50、100、150、200和 250 mg碳水化合物较正对照组显著提高了出壳鸡只重量及相对重量（P＜0.05），各处理组较对照组显著提高了出壳鸡只相对重量（P＜0.05）。除了100 mg碳水化合物组外，其他处理组较两对照组均显著提高了出壳鸡只重量（P＜0.05），而各处理组之间对出壳鸡只重量和相对重量均无显著影响（P ＞ 0.05）。

2.3 出壳仔鸡肝脏重量和肝糖原含量 胚胎注射碳水化合物对鸡蛋高温下孵化后出壳仔鸡肝脏重量和肝糖原含量的影响见表3。胚胎孵化温度和两个试验对出壳鸡只肝脏相对重量和肝糖原含量均无显著影响（P＞0.05）。正对照组、50、150、200和250 mg碳水化合物组较负对照组显著提高了出壳鸡只重量（P＜0.05），而正对照组和碳水化合物处理组较负对照组显著降低了肝脏相对重量（P＜0.05）。胚胎注射250 mg碳水化合物组肝糖原含量最高（P＜0.05），而正对照、负对照和50 mg碳水化合物组肝糖原含量最低（P＜ 0.05）。

表2 胚胎注射碳水化合物对高温下鸡蛋孵化重量和出壳小鸡重量的影响

表3 胚胎注射碳水化合物对鸡蛋高温下孵化后出壳仔鸡肝脏重量和肝糖原含量的影响

2.4 出壳仔鸡胸肌重量和肌糖原含量 胚胎注射碳水化合物对鸡蛋高温下孵化后出壳仔鸡胸肌重量和肌糖原含量的影响见表4。胚胎注射100、150、200和 250 mg碳水化合物较 50 mg碳水化合物和对照组显著提高了胸肌相对重量（P＜0.05），而各组对肌糖原含量的影响均无显著差异（P＞ 0.05）。同时，胚胎注射 150、200和250 mg碳水化合物较对照组、50和100 mg碳水化合物组显著提高了出壳鸡只的糖原指数（P＜0.05）。鸡胚孵化温度和两个试验对胸肌相对重量、肌糖原含量及糖原指数均无显著影响（P＞0.05）。

表4 胚胎注射碳水化合物对鸡蛋高温下孵化后出壳仔鸡胸肌重量和肌糖原含量的影响

3 讨论

本研究结果表明，鸡胚注射碳水化合物提高了幼雏孵化重与蛋重的比例，但对幼雏孵化性状无明显影响。Smirnov等（2006）结果发现，鸡胚肠道腔内注射碳水化合物可以改善肠道形态，提高营养吸收。Zhai等（2011）发现，鸡胚注射0.25 g/mL葡萄糖、果糖、蔗糖等复合物对孵化率无显著影响，但雏鸡重量与注入体积呈正相关。上述结果表明，鸡胚注射碳水化合物对胚胎代谢有一定影响。但影响鸡胚孵化性能的因素有很多，如碳水化合物类型、鸡只品种、鸡胚大小和种鸡的生长阶段。

雏鸡糖原状况分析结果表明，鸡胚注射碳水化合物增加了雏鸡肝糖原浓度，但对肌糖原无显著影响，这与Uni等（2005）的研究结果一致。此外，肝糖原浓度高于肌糖原说明肝糖原对胚胎的营养状况比肌糖原更敏感，这可能与调节肌糖原的机制不受营养状况的影响有关（Uni等，2005）。

两个试验结果表明，周龄较大的母鸡（35周龄）产蛋和孵出的小鸡更重，孵出小鸡的肝糖原浓度和糖原指数较年轻母鸡低。此外，孵化性状不受母鸡年龄的影响，这些结果与Oloyo（2003）的研究结果一致。蛋的大小与雏鸡孵化体重呈正相关，大种蛋孵出的小鸡体重较高，是因为与小鸡蛋孵出的小鸡相比，大鸡蛋孵出的小鸡营养供应过剩，孵化时剩余的卵黄囊大（Lourens等，2006）。不同周龄母鸡孵出的小鸡糖原水平的差异可能表明其代谢率的差异，因为老母鸡的胚胎比年轻母鸡的胚胎产生更多的代谢热和二氧化碳气，这也表明糖原需求存在差异。较年长母鸡孵出的小鸡糖原水平较低，表明胚胎代谢率较高，因此，与较年轻母鸡相比，对糖原的需求较高（O’Dea等，2004）。

4 结论

提高鸡胚孵化后期（16～21 d）的孵化温度和种鸡日龄会对出壳小鸡的体重和糖原状态产生负面影响，但不影响孵出小鸡的孵化特性。鸡胚注射100 mg碳水化合物会缓解鸡胚高温孵化对仔鸡生长的抑制，使糖原状态得以恢复。