摘要：目的：探究LASP1在鼻咽癌组织中的表达，并同时分析该蛋白对该类患者预后的影响。方法：选取2014年6月至2019年5月的50例鼻咽癌患者作为标本来源，利用免疫组化法对其组织标本中LASP1的表达进行检测，并利用Kaplan-Meier法分析该蛋白对患者预后预测的影响。结果：（1）鼻咽癌患者的N（分期）与TNM分期均属于危险因素，高、低表达之间的差异具有统计学意义（<0.05）。（2）LASP1为鼻咽癌患者的独立预后因子，<0.05，差异具有统计学意义。结论：通过分析LASP1的表达明确了对鼻咽癌患者预后的影响，为今后鼻咽癌的临床诊断与治疗提供了新的标志物与靶点。

关键词：LASP1蛋白;鼻咽癌;表达与预后

【中图分类号】R856    【文献标识码】A    【文章编号】2107-2306（2019）06-059-02

目前恶性肿瘤已经严重威胁到人们的身体健康以及生命安全，对于此类疾病，临床中大多采用化学治疗的方式。鼻咽癌是一类具有地域性的恶性肿瘤，多发于我国东南亚以及我国的南方地区，这种疾病的发病率占头颈部恶性肿瘤的第一位。LASP1最初出现于乳腺癌转移性淋巴结cDNA文库中，又称为MLN501。该蛋白能够在机体中的肌动蛋白聚集位置起到结构支架的作用，同时能够转移至细胞核中，发挥细胞核转导分子的能力。LASP1在食管癌、乳腺癌及鼻咽癌等多种肿瘤中的高表达使其能够参与肿瘤迁移、粘附以及增殖等过程。通过前期研究发现通过遏制LASP1能够有效遏制肿瘤的生长以及转移。但是在研究过程中发现目前缺少关于LASP1影响鼻咽癌预后预测结果的研究，因此本实验将研究LASP1在鼻咽癌组织中的表达及对预后的影响，现汇报如下。

1材料与方法

1.1一般资料

选取2014年6月至2019年5月的50例鼻咽癌患者作为标本来源。所有患者均已在入院后接受HE染色检查，并由病理科医师进行确诊;此外TNM分析必须根据AJCC/UICC最新分期标准进行分析。所有研究对象的随访时间从开始治疗的第一天至死亡或最后一次复查为止。所有研究对象的鼻咽癌细胞株HNE1、SUNE1、CNE2、CNE1以及HONE1等均由本院放疗科实验室长期保存。本研究已通过伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1免疫组化实验

将鼻咽癌标本蜡块切成2μm薄片放在玻片上，脱腊及脱水后利用柠檬酸钠缓冲溶液进行冲洗。LASP1购自于Proteintech公司，在4℃的环境中孵育并过夜。经过0.05%PBSTriton清洗后必须再次孵育，环境为室温。随后用同样方式清洗后，将含有DAPI的封片剂进行染色并封片。封片后于零下20℃的环境中避光保存，利用激光共聚焦显微镜进行观测。每張切片均取3个视野，使用ImageProPlus软件分析免疫组化结果。其分析过程包括：选取图片上的目标分析区域，并检测其积分光密度，随后选取其有效区域的面积并进行计算光密度平均值。期间使用的ABC染色试剂盒以及DAB显色试剂盒均由Vector Laboration公司生产。

1.2.2Western Blot实验

利用Bio Rad Pro-tein Assay Kit试剂盒对LASP1蛋白样品浓度进行检测，并利用Bio-Rad电泳槽将蛋白转移至PVDF膜上。加入LASP1一抗并孵育过夜后加入对应的二抗，孵育1h后根据超敏发光液试剂盒说明书将其显影与定影，最后利用胶片扫描的方式存档。

1.2.3Real-time PCR实验

首先提取细胞株总RNA，随后利用M-MLV逆转录酶进行转录。转录结束后根据SYBR GreenqPCR SuperMix-UDG的操作说明书定量分析PCR。

1.3观察指标

（1）LASP1在鼻咽癌患者中的表达;（2）LASP1与鼻咽癌患者预后的关系。

1.4统计学处理

针对研究数据，采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析。计数资料用[（%）]表示，运用进行检验。同时利用多因素分析方式评估预后预测效果的影响因子。<0.05，代表差异具有统计学意义。

2结果

2.1LASP1在鼻咽癌患者中的表达

经研究发现，分析患者的年龄、性别以及病理分期等因素分别在低表达及高表达中的表现可以证实，鼻咽癌患者的N（分期）TNM分期均属于危险因素，高低表达之间的差异比较显著，<0.05，差异具有统计学意义。附表1。

2.3 LASP1与鼻咽癌患者预后的关系

从本次研究结果来看，众多变量中仅LASP1为鼻咽癌患者的独立预后因子，<0.05，差异具有统计学意义。附表2。

3讨论

既往研究表示LASP1是细胞在运动过程中的一种关键蛋白分析，特别是在恶性肿瘤中其表达水平更高。LASP1作为细胞支架蛋白组成之一具有影响细胞迁移的作用。前期研究结果显示LASP1含有LIM、NR和SH3结构域，不仅能够良好地在胞浆中表达，并且能够与CXCR2和Vi-mentin等多种蛋白结合并参加肿瘤细胞与间质细胞的迁移过程。本研究结果显示，LASP1低表达患者的OS、DMFS、RFS水平均显著低于LASP1高表达患者，证实LASP1在鼻咽癌发生进展过程中占据重要地位。此外多因素研究结果表示LASP1高表达以及TNM分期是鼻咽癌患者OS的独立预后因子，证明LASP1表达水平的高低能够进一步鉴别鼻咽癌患者预后的好坏。近几年的研究结果显示LASP1蛋白分子与CXCR12结合后能够有效促进LASP1细胞核转位并激活细胞内的甲基化过程，而本研究结果也表示LASP1主要表达范围为鼻咽癌细胞胞浆，能够借助与骨架蛋白结合的功能发挥作用，与上述结果基本一致。

综上所述，LASP1在鼻咽癌组织中具有非常明显的表达，并且其表达水平与患者的生存情况呈正相关，因此LASP1表达也是鼻咽癌患者的独立预后因子。由此证实LASP1作为肿瘤促进因子不仅能够参与鼻咽癌的发展，而且能够为鼻咽癌的临床治疗指导提供有力依据。

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作者简介：黄金宁，男，1978年8月出生，本科学历，民族：汉族;籍贯：广东电白;研究方向：主要从事病理学诊断;职称：主治医师