李亦聪　潘恩山　陈翠萍

摘要 目的：探討生精种玉汤治疗少精弱精性不育的疗效及对精液中Caspase 3和Caspase 8的影响，为其临床诊治提供参考。方法：选取2015年6月至2018年6月惠州市中心人民医院收治的少精弱精性不育患者96例作为研究对象，按照随机数字表法分为对照组和观察组，每组48例。对照组患者给予五子衍宗丸治疗，观察组患者给予生精种玉汤治疗，比较2组患者治疗前后精液各参数以及精液中、精子中Caspase 3和Caspase 8水平变化。结果：与治疗前比较，2组患者精子密度、精子成活率、a级精子活力以及a+b级精子活力等精液各参数均明显升高，精液中Caspase 3、Caspase 8水平和精子中Caspase 3和Caspase 8水平明显降低（均P<0.05），且观察组上述指标改善更为显著（P<0.05）。观察组患者治疗有效率为95.83%，明显高于对照组的83.33%，2组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：生精种玉汤治疗少精弱精性不育患者，可以明显降低精液中Caspase 3和Caspase 8水平，增强精子活力，标本兼治，效果更加显著，值得临床推广使用。

关键词 生精种玉汤;少精弱精性不育;精子密度;精子活力;精子成活率;Caspase 3;Caspase 8;疗效

Therapeutic Effects of Shengjing Zhongyu Decoction on Oligospermia and Asthenospermia Infertility and Its Effects on Caspase 3 and Caspase 8 in Semen

Li Yicong1，Pan Enshan2，Chen Cuiping1

（1 Department of Traditional Chinese Medicine，Huizhou Central People′s Hospital，Huizhou 516001，China; 2 Department of Urology，Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Affiliated to Southern Medical University，Guangzhou 510000，China）

Abstract Objective：To explore the effects of Shengjing Zhongyu Decoction on the treatment of oligospermia and asthenospermia infertility and its influence on Caspase 3 and Caspase 8 in semen，and to provide reference for its clinical diagnosis and treatment.Methods：A total of 96 patients with oligospermia and asthenospermia infertility admitted to Huizhou Central People′s Hospital from June 2015 to June 2018 were enrolled in the study.They were divided into a control group and an observation group according to random number method，with 48 cases each.The control group was treated with Wuzi Yanzong Pill.The patients in the observation group were treated with Shengjing Zhongyu Decoction.The parameters of semen and the changes of Caspase 3 and Caspase 8 in semen and sperm were compared before and after treatment.Results：Compared with before treatment，the sperm density，sperm survival rate，a-level sperm activity，a+b-level sperm activity and other semen parameters of the 2 groups were significantly increased，and the levels of caspase-3 and caspase-8 in semen and sperm were significantly decreased，and the improvement of the above indicators was more significant in the observation group（P<0.05）.The effective rate of treatment in the observation group was 95.83%，which was significantly higher than 83.33% in the control group.The difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion：Shengjing Zhongyu Decoction can significantly reduce the levels of Caspase 3 and Caspase 8 in semen，enhance the sperm motility，and treat the symptoms more effectively.It is worthy of clinical promotion.

Key Words Shengjing Zhongyu Decoction; Oligospermia and asthenospermia infertility; Sperm density; Sperm vitality; Sperm survival rate; Caspase 3; Caspase 8; Efficacy

中图分类号：R242文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.09.029

近年来，随着我国社会的发展，环境污染加重以及人们生活节奏的不断加快，尤其是日常食品中类雌激素作用的化合物含量的增加，男子精子的数量呈现逐年降低的趋势[1]。研究显示，经统计世界范围内男子的精子数量降低有50%左右，不育症发病率也上升至16%左右，对社会安定以及家庭和睦产生重要的影响[2]。在男性不育症中，少精弱精者占有不低于60%的比例。目前现代医学主要通过辅助生殖技术、手术、抗炎、抗激素以及激素等方面着手治疗，但是最终疗效欠佳[3]。中医药治疗男性不育症由来已久，具有相对较为丰富的经验多采用五子衍宗丸中成药进行治疗，几乎无不良反应，疗效独特[4]。张小庆等[3]研究显示，五子衍宗丸联合治疗少精弱精性不育患者可以明显改善其精液治疗指标。生精种玉汤是著名中医韩延华教授研制的临床经验方，对于少精弱精性不育具有较好的疗效[5]。故本文探讨生精种玉汤治疗精弱精性不育的疗效及对精液中Caspase 3和Caspase 8的影响，为其临床诊治提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年6月至2018年6月惠州市中心人民医院治疗的少精弱精性不育患者96例作为研究对象，按照随机数字表法分为对照组和观察组，每组48例。2组患者年龄、病程以及少精弱精分型等一般资料差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。见表1。所有患者中医证型均为肾虚精亏证。

1.2 诊断标准

1.2.1 西医诊断标准 参考WHO第4版《人类精液及精子-子宫颈黏液相互作用实验室检验手册》中关于弱精、少精症的诊断标准[6]，具体如下：1）少精子症、弱精症：精子成活率<60%/h，精子活动力a级<25%/h或者a+b级<50%/h为弱精症;精子数<2×107/mL为少精症。2）弱精症病情程度以及精子活动力分级：0度不活动为d;I度原地摆动为c;Ⅱ度慢速直线运动为b;Ⅲ度以上为快速直线运动为a。a<10%/h或者a+b级<20%/h为重度;a级处于11%～20%/h或者a+b级处于21%～40%/h为中度;a级处于21%～24%/h或者a+b级处于41%～49%/h为轻度。3）少精症病情程度与精子密度分级：染色体正常，但无精子为F;精子密度<106/mL为E;精子密度处于106～107/mL为D;精子密度处于107～20×106/mL为C级;精子密度处于20×106～40×106/mL为B级;精子密度<40×106/mL为A级。

1.2.2 中医诊断标准 参考《中药新药临床研究指导原则》[7]中关于少精弱精性不育的诊断标准，具体如下：次症：脉沉细弱，舌淡苔薄白，夜尿增多，早泄遗精，精神疲惫，注意力不集中，脱发齿松，多梦失眠，记忆力减退，耳鸣头晕，以上症状无记0分，有则记2分。主症：腰膝酸软，性欲淡漠，不育，以上每项症状分为无、轻、中、重，分别记为0、2、4、6分。必须具备上述主症，外加上述至少1个次症即可诊断。肾虚精亏证证候表现：脉无力或细弱，舌淡苔薄，腰膝酸软，阴囊潮湿，耳鸣头晕。

1.3 纳入标准 1）符合上述诊断标准者;2）女方检查正常，未孕，未采取任何避孕措施，性生活正常;3）患者及家属同意并积极配合本次研究，签署知情协议书，本研究经本院伦理委员会审核通过（伦理审批号：20150105）。

1.4 排除标准 1）逆行排精者;2）无精子症者;3）服用抗肿瘤、抗癫痫等有碍精子活力以及生精药物者;4）中重度前列腺炎、附睾炎以及睾丸炎者;5）合并心、肝、肾、遗传、免疫以及内分泌等疾病者;6）生殖器官外伤史、手术史，影响生育功能者;7）未按规定用药或者临床治疗不完整者。

1.5 治疗方法 对照组患者口服五子衍宗丸（福州海王金象中药制药有限公司，国药准字Z35020749），2次/d，1丸/次。观察组患者口服生精种玉汤治疗，处方为熟地黄25 g、山药20 g、黄精20 g、枸杞子20 g、鳖甲15 g、淫羊藿15 g、杜仲15 g、续断15 g、白芍10 g、柴胡10 g、炙甘草10 g。每日1剂，水煎取汁400 mL，分2次温服。2组均以2个月为1个疗程，服药期间禁止过度吸烟酗酒，避免與有毒物质、放射线以及高温等有害环境因素接触以及相关精神刺激。

1.6 观察指标 1）精液常规检查：治疗前后对所有患者进行精液常规检查，禁欲4～5 d，手淫取精，之后置于恒温箱（37 ℃）中保存，采用精液全自动分析系统（BTS-QP型;北京倍特双科技发展有限公司）对精液相关参数进行分析。2）精液中Caspase 3和Caspase 8水平测定：将精液通过离心机（Ortho BioVue;强生（上海）医疗器材有限公司）在37 ℃，离心半径10.5 cm，转速3 000 r/min条件下，离心15 min;对精浆进行分离，用生理盐水对剩下的精子进行清洗离心，转速3 000 r/min条件下，离心5 min。将精子、精液分别编号，置于-40 ℃冰箱保存。采用酶联免疫吸附法对精液中和精子中的Caspase 3和Caspase 8水平进行测定，试剂盒购于上海信裕生物科技有限公司，操作方法严格按照说明书执行。

1.7 疗效判定标准 参考《中药新药临床研究指导原则》[7]和《不育夫妇标准检查与诊断手册》中关于少精弱精不育症的临床疗效评价标准，具体如下[8]：1）无效：治疗前后无变化，或者治疗后精子成活率、活力以及密度≤30%;2）有效：弱精症成活率>30%，精子活力a或者a+b提高>30%，少精症精子密度提高>30%，精子活动力和密度有群级间改善;3）显效：虽未受孕，但治疗后精子成活率≥60%/h，弱精症精子活动力处于正常（a级>25%/h或者a+b级≥50%/h），少精症精子数量≥20×106/mL;4）痊愈：精液无异常或治疗期间配偶怀孕。总有效率=（痊愈+显效+有效）/总数×100%。

1.8 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件进行数据分析，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，行t检验，计数资料采用[例（%）]表示，行χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组患者治疗前后精液各参数比较 与治疗前比较，2组患者精子密度、精子成活率、a级精子活力以及a+b级精子活力等精液各参数均明显升高（P<0.05），且观察组患者上述指标升高更为显著（P<0.05）。见表2。

2.2 2组患者治疗前后精液及精子中Caspase 3和Caspase 8水平比较 与治疗前比较，2组患者精液中Caspase 3和Caspase 8水平均明显降低（P<0.05），且观察组患者上述指标降低更为显著（P<0.05）。与治疗前比较，2组患者精子中Caspase 3和Caspase 8水平均明显降低（P<0.05），且观察组患者上述指标降低更为显著（P<0.05）。见表3。

2.3 2组患者临床疗效比较 观察组患者治疗有效率为95.83%，明显高于对照组的83.33%，2组比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。

3 讨论

中医学对于男性不育症的研究历史悠久，《山海经》云“幼鸟，食之宜子孙……佩之宜子孙”。中医学认为，人体肾藏精，主生殖，肾部精气不足会对人的正常生长发育以及生殖功能产生直接性的影响[9]。本病治疗时，应在补肾的基础上，加脾胃等其他脏器的进补。脾胃为人体后天之根本，生化气血之源头;肾部之精气需要脾胃化生而成的水谷精微促进形成，故而人体脾胃的好坏间接或者直接性地对肾之精气产生作用[10]。陈修园曾云：“人之即生……，而后肾得以补益”。另外，中医学也有“精血同源”的理论，血可生精，亦可化血。《张氏医通》云：“气不耗……归精于肝而化清血”。目前临床上认为男性不育症的主要病因有生殖系统病变以及精索静脉曲张等，久积入络，不通则瘀，肝气郁结，气机不畅，进而诱导男性不育的发生[11]。故本病的主要病机为血瘀、肝郁、肾脾亏虚，其中肾虚为本，血瘀、肝郁为标，临床治疗应以补肾为主，同时兼顾肝脾二脏的补益[12]。

凋亡是机体异常细胞清除异己组织器官正常发育维持所必须的一种细胞程序性死亡，在人体睾丸组织中凋亡对于睾丸成熟以及精子分化具有重要作用[13]。其中Caspase在凋亡机制中起着重要的作用，主要通过线粒体途径和膜死亡受体途径介导细胞凋亡，而Caspase3和Caspase8是其中最重要的2个启动因子[14]。精浆中分离出来的Caspase可对射精前精子凋亡情况进行直接性反映;而从精子中分离出来的Caspase可以对射精后精子凋亡情况进行反映，也有可能是附睾或者睾丸中少量发育不全精子的凋亡反映。而健康人的精子在射精后死亡不是由于凋亡引起的而是自身坏死[15]。对照组患者Caspase 3和Caspase 8得到一定程度的改善，可能是由于五子衍宗丸中的五味子、覆盆子可固肾涩精，菟丝子、枸杞子可益精补肾，诸药配合起补髓填精滋肾的功效，改善肾功能，增强附睾以及睾丸功能，降低精液中Caspase 3和Caspase 8水平，提高精子质量[16]。中医学认为，肾精亏虚是引起男子不育主要原因，生精种玉汤方中熟地黄为君药，起填髓益精、滋阴补血之效，现代药理学研究显示，熟地黄可通过作用于機体骨髓造血系统，起补血滋阴之效。川续断、杜仲、淫羊藿可温补肾阳，阴阳互济，鼓舞肾气，生化无穷;鳖甲潜阳滋阴，以补阴药配伍，阴阳互补;黄精、山药可健脾养阴益气，以旺后天滋补先天之功，生精之源不竭;枸杞子可养精补肾，上述诸药均为臣药。现代药理学研究显示，枸杞子对脂质代谢或抗脂肪肝的作用，淫羊藿可通过促进机体精液分泌，刺激神经，间接性的兴奋性欲，黄精可升高肝脏超氧化物歧化酶（SOD）活性，降低心肌脂褐质，有研究[12]显示，弱精性不育与机体内SOD水平降低有关。白芍可柔肝养血敛阴，与柴胡合用共起敛阴阳达肝气之功，有助于全身血行，通瘀滞，进而促使精子活动有力，为佐药。甘草调和诸药，健脾胃，中和方中佐使药[17]。各药合用共奏填精补肾之效，补益肾阴肾阳，充盈肾气，旺盛生精，降低精液中Caspase 3和Caspase 8水平，促进精子活动更加有力，增强疗效。

综上所述，生精种玉汤治疗少精弱精性不育患者，可以明显降低精液中Caspase 3和Caspase 8水平，增强精子活力，标本兼治，效果更加显著，值得临床推广使用。

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（2019-02-19收稿 责任编辑：芮莉莉）