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流行性感冒病毒检测方法的研究进展

2019-09-10吕涵颖

健康科学 2019年2期
关键词:分子生物学病毒检测检测方法

吕涵颖

摘要:流行性感冒近年来在全球范围内持续频繁爆发,2009年和2013年,都分别爆发了全球性的甲型流感和H7N9禽流感,对于动物、人类生存以及社会的发展,均造成了十分严重的影响。基于此,本文首先对流行性感冒病毒基因发展的趋势进行了探究,提出了各种不同类型流行性感冒病毒基因发展趋势;其次,提出了流行性感冒病毒的主要检测手段,通过此种方式,探究出流行性感冒病毒检测方法的发展历程和研究进展。

关键词:流行性感冒;病毒检测;检测方法;分子生物学

引言:随着国内科学技术水平的提升,医疗技术也得到了飞速发展。但是在此过程中,流行性感冒病毒也变得越发复杂。流行性感冒病毒简称流感病毒,是一种能够造成动物和人类患流行性感冒的病毒类型,主要分为甲型、乙型4和丙型三种不同的类型。在临床上对患者是否感染流行性感冒病毒进行及时地诊断和治疗,具有十分重要的意义。如何对流行性感冒病毒进行科学检测,也成为了相关工作人员的工作重点之一。

1 流行性感冒病毒基因发展趋势

1.1甲型H1N1流感病毒发展趋势

1918年,西班牙地区爆发了大规模流感,流行性感冒病毒从欧洲开始,迅速传播到了美洲、亚洲和澳洲等国家和地区。根据调查统计显示,总计超过两千万人死于此次大规模流感,死亡人数占了当时世界人口总数的30%。此后,实验证明,此次流行性感冒病毒的基因类型为H1N1,主要在鸟类、猪和人类之间传播。2009年6月,WHO和美国CDC宣布新一轮的流行性感冒病毒爆发大流行,共计造成全球范围内1万8千人死亡。截止到2010年6月,全世界范围内已经有超过300例H1N1毒株病例报告显示,该病毒对奥司他韦耐药。根据实验研究证明,此次病毒为甲型H1N1基因型病毒。此次流感病毒与上世纪出的流感病毒相比,进一步与欧亚猪流感病毒相互结合,形成了一种新型四联重配体流感病毒[1]。

1.2甲型H2N2流感病毒發展趋势

1956年中国贵州爆发流行性感冒,之后从我国开始传入到香港、新加坡和美国等地,造成了全球性的流行性感冒病毒大流行。虽然在此种流行性感冒病毒爆发一年之后,就已经研究出了针对性的疫苗,但是该疾病大规模流行,仍旧造成全球超过一百万的人员死亡。除了1956年亚洲流感大爆发之外,部分学者还提出,1889年的俄罗斯流感也是因为甲型H2N2流感病毒所引起的。

1.3甲型H3N2流感病毒发展趋势

1968年,香港最先爆发了甲型H3N2病毒所引起的流行性感冒,随后造成了全世界范围内的流感大流行。此次流行性感冒共造成了全球一百万人死亡,甲型H3N2病毒是由甲型H2N2病毒抗原性转变而来。根据相关领域的调查和统计显示,进入到21世纪之后,甲型H3N2所造成的季节性流感占据了大多数。

2 流行性感冒病毒主要检测手段

在对流行性感冒病毒进行检测的过程中,可以根据实际情况,合理地应用不同的方法,具体的方法种类如下:

2.1病毒分离培养检测方法

虽然流行性感冒病毒的检测方法与手段,都在持续不断地发展和创新,但是流行性感冒病毒培养方法,仍旧是一种有效性较高的检测手段。此种方法的应用,主要是通过对流行性感冒病毒的易感性神经氨酸酶抑制剂进行检测,借助病毒分离培养的手段,还可以进行抗病毒疫苗的生产。传统的病毒分离培养方法,操作方法较为复杂,并且花费的时间更长。经过了长时间的研究分析,快速病毒分离培养方法,已经逐步超过传统方法,以更加简便并且省时的优势,成为了业内发展的首选方法。根据研究显示,快速病毒培养方法的检测率可以达到98.6%。

2.2血清学检测方法

血清检验方法同样具有操作简单且耗时较短的优势和特点。此种方法目前已经成为了流行性感冒病毒检测工作中,最为常见的一种方法。血清学检测方法主要是根据抗原抗体反应原理,通过对核蛋白、血凝素、膜蛋白以及神经氨酸酶蛋白等进行检验,可以提高检测的有效性。比如,在病毒中和试验中,可以通过抑制病毒进入到细胞以及阻断病毒复制抗体的方法,进行检验。此种方法具有较高的特异度与敏感度。琼脂凝胶扩散试验,主要可以用于对甲型流感病毒的HA进行检验和鉴别,根据抗体在含有流感病毒结合的红细胞琼脂胶上扩散,可以形成抗原抗体的沉淀线,以此对流行性感冒病毒感染产生的血清抗体进行检验[2]。

2.3基因芯片技术检测方法

基因芯片技术检测方法,主要是在同一时间,将大量的探针固定到支持物上方,同时对大量的序列和样品进行检验与分析,进而解决传统核酸印迹杂交技术存在的自动化水平较低、操作复杂、序列数量较少一级检测效率较低等方面的问题。此种技术的合理化应用,可以对基因表达的突变检测、图谱鉴定、基因组文库、多态性分析和杂交测序等进行检测。该项技术的合理应用,可以为流行性感冒病毒的检验工作,提供更为科学和精准的检验结果和分析数据。但是,该项技术在实际的应用中,也会面临着成本过高、操作条件要求较高以及后期结果分析复杂等方面的问题,因此不适合一般实验室进行操作。

2.4金标快速检测方法

除了上述几种方法以外,还可以使用金标快速检测方法进行检验。与其他方法不同,此种方法可以通过直接检测的方式,采集到的样本进行检验,并对流感病毒的A型和B型进行区分。根据临床使用情况可以看出,此种方法在对流行性感冒病毒进行检验的过程中,全程耗时约为20min,并且具有较高的特异性。但是,此种方法的敏感度相对较低,仅适合对群体性的流行性感冒病毒爆发进行判断与排除。在这一方法的基础上,联合使用实时荧光定量PCR检测方法,可以对流感病毒中的病毒核酸进行检测。该方法具有重复性好、直观和特异性强的优势特征,能够通过动态检测的方式,获取动态检测结果,并且不需要经过后续的加工和处理,有效地防止了出现增产物污染问题。以PCR检测方法为基础发展的依赖核算序列扩增方法,也被广泛地应用与流感病毒检测工作中。该项技术能够通过核苷酸序列等温扩增,完成酶促反应,只需要4h至6h就可以完成基本的检测。

3 结论

综上所述,流行性感冒作为一种遍布全世界的传染性疾病,在近几年的发病率显著提升。作为一种易传播、易变异的疾病类型,流行性感冒需要被建立快速、准确且有效的流感病毒检测方法。通过本文的研究可以得出,病毒分子培养检测方法、血清学检测方法、基因芯片技术检测方法和金标快速检测方法,均具有不同的优势和特征,针对实际情况选取合理的方法,可以提高检测工作有效性。

参考文献:

[1]罗鹏,杨永耀,吕沁风.流行性感冒病毒监测及检测技术的研究进展[J].现代生物医学进展,2014,14(33):6597- 6600.

[2]苏文哲,柯昌文.流行性感冒病毒的耐药性相关研究进展[J].中国病毒病杂志,2011,1(03):171-176.

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