郭艳　刘英来　李洪建　赵清爽　邢耘

[摘 要]文章旨在建立小儿氨酚黄那敏颗粒中有关物质对氯本乙酰胺的检测方法。文章采用高效液相色谱法，对该成分的检测方法进行了摸索，结果显示所建方法简便，专属性强，对氯苯乙酰胺与对乙酰氨基酚能够有效分离，可用于测定小儿氨酚黄那敏颗粒中有关物质对氯苯乙酰胺。

[关键词]小儿氨酚黄那敏；有关物质；对氯苯乙酰胺；检测方法

[DOI]10.13939/j.cnki.zgsc.2016.36.247

小儿氨酚黄那敏颗粒为甲类非处方儿童感冒药，适用于缓解儿童普通感冒及流行性感冒引起的发热、头痛、四肢酸痛、打喷嚏等症状。本品收载于国家药品标准地方标准上升国家标准第三册[WS-10001-（HD-0214）-2002]，但质量标准中无有关物质检查项，该制剂中对氯苯乙酰胺为对乙酰氨基酚的工艺杂质，具有遗传毒性结构，故建立该检测方法，有利于提高患者用药安全性。

1 仪器与试药

Agilent1260高效液相色谱仪；小儿氨酚黄那敏颗粒[葵花药业集团（衡水）得菲尔有限公司，批号：110801]；对乙酰氨基酚[河北冀衡（集团）有限公司]，对乙酰氨基酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100078-200414）对氯苯乙酰胺对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100850-201102）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：迪马C8色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠8.95g，磷酸二氢钠3.9g，加水溶解至1000ml，加10%四丁基氢氧化铵12ml）—甲醇（60∶40）；检测波长为245nm；柱温：40℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：20μl。

2.2 测定方法

精密称取对乙酰氨基酚含量测定项下的细粉适量（约相当于对乙酰氨基酚200mg），置容量瓶中，精密量取溶剂[甲醇-水（4∶6）]制成1ml中约含20mg对乙酰氨基酚的溶液，摇匀过滤，取续滤液作为供试品溶液；另精密量取对氯苯乙酰胺对照品和对乙酰氨基酚对照品适量，用溶剂[甲醇-水（4∶6）]溶解并稀释制成1ml中各含1μg的混合溶液，作为对照品溶液。照色谱条件，精密吸取对照品溶液20ul，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对氯苯乙酰胺色谱峰的峰高约为满量程的10%，再精密量取供试品溶液与对照品溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算，含对氯苯乙酰胺不得过0.005%。

2.3 专属性试验

2.3.1 空白干扰试验

精密称取阴性制剂（按处方量除对乙酰氨基酚外的其他原料与辅料）约3.2g，置25ml量瓶中，加入溶剂10ml使溶解，摇匀，作为阴性空白溶液，精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，结果在对氯苯乙酰胺对照品相应保留时间处未出峰，表明空白无干扰。

2.3.2 破坏性试验

取供试品1批（批号：110801）置表面皿中，于5000lx强光下和60℃水浴中放置6个小时；用流动相溶解并稀释成1ug/ml的溶液，作为强光破坏和高温破坏溶液。分别精密量取强光破坏和高温破坏溶液20ul分别注入液相色谱仪，记录色谱图。各破坏溶液分别进行检测，结果见下图，表明小儿氨酚黄那敏颗粒在高温、强光、氧化破坏条件下均未生产对氯苯乙酰胺。表明对氯苯乙酰胺并非对乙酰氨基酚降解而产生，其来源是对乙酰氨基酚原料药制备过程中引入的杂质。

小儿氨酚黄那敏颗粒破坏性试验的色谱

2.4 线性关系考察

精密称取对氯苯乙酰胺对照品10mg，置100ml量瓶中，加溶剂[甲醇-水（4∶6）]溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为对氯苯乙酰胺对照溶液A，精密量取对氯苯乙酰胺溶液A 0.2ml，0.5ml，0.8ml，1.0ml，1.2ml，1.5ml分别置100ml容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度。分别精密量取上述溶液注入色谱仪进行测定，记录色谱图。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，回归方程为：y=212139x+1694.7，其中R2=0.999，表明对氯苯乙酰胺浓度在0.06882μg/ml～1.7205μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 供试品溶液稳定性试验

取制备好的供试品溶液分别于0、2、4、6、8h进行测定，其RSD均小于2%，且杂质个数未见增加，结果表明该溶液在8h内稳定性良好。

2.6 精密度试验

取样品6份，分别加入一定量的对氯苯乙酰胺对照品，由不同的分析人员，在不同的设备上，按有关物质对氯苯乙酰胺的方法测定，记录色谱图。结果表明，仪器精密度良好。

2.7 最低检测限

精密称取对氯苯乙酰胺对照品适量，加溶剂稀释制成约含1ug/ml对氯苯乙酰胺的溶液，进样，精密吸取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。当信噪比为3∶1时，对照品溶液浓度即为最低检测浓度，经计算得出对氯苯乙酰胺的检测限为0.4ng。

2.8 定量限

精密称取对氯苯乙酰胺对照品和对乙酰氨基酚对照品适量，用溶剂[甲醇-水（4∶6）]溶解并稀释制成1ml中各含1μg的混合溶液，精密量取上述混合溶液3ml，置50ml容量瓶中，加入溶剂稀释至刻度，摇匀，即为最低定量限浓度的溶液，配制6份。依法测定，当信噪比比例为10∶1，即为定量限，记录色谱图，经计算定量限为1.2ng。

2.9 样品有关物质的测定

取3批样品，按照 “2.2”项下进行测定，供试品有关物质测定结果见下表。

3 讨 论

3.1 耐用性的考察

分别考察流动相比例变化±5%、柱温变化、不同型号色谱柱，鉴于样品中未检测出对氯苯乙酰胺，为验证方法的耐用性，我们向样品中添加一定量的对氯苯乙酰胺对照品进行测定，结果表明流动相比例变化±5%，柱温变化±5℃以及不同型号色谱柱条件下，对氯苯乙酰胺峰与对乙酰氨基酚峰的分离度符合要求，色谱峰峰形良好，试验结果无差别，表明该检测方法耐用性强。

3.2 结论

本文中有关物质对氯苯乙酰胺的测定方法符合方法学的各项要求，并且对不同型号的色谱柱、不同柱温等有良好的耐用性，从儿童用药安全性角度考虑，建立本品有关物质对氯苯乙酰胺检测方法有着十分重要的意义。因此，建议将该方法定入小儿氨酚黄那敏颗粒的质量标准中。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].二部.北京：化学工业出版社，2010：234.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].二部.北京：化学工业出版社，2010：194.