华 蕾 李 洁 杜文渊

随着生活水平的提高、生活节奏加快，加之人口老龄化、环境污染多方面因素，癌症发病率逐年增加，严重威胁人类的生命健康[1]。宫颈癌是妇科第二大常见的癌症，据相关研究数据，每年女性癌症患者约5%是死于宫颈癌[2]。宫颈上皮内瘤样变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)是一种与宫颈浸润癌高度密切相关的病变，多发生于25～35岁女性[3]。根据其发展趋势分为低级别宫颈上皮内瘤样变、高级别宫颈上皮内瘤样变和原位腺癌，其中低级别宫颈上皮内瘤样变(CINⅠ级)大部分可自然消退，而高级别宫颈上皮内瘤样变(CINⅡ级、CINⅢ级)具有癌变可能，目前被视为癌前病变[4]。CIN分级反映了宫颈癌发生发展的过程。流行病学研究发现，CIN的发病率目前也呈上升趋势，且逐渐呈年轻化趋势，严重威胁着女性的健康。如何在宫颈上皮内瘤样变人群中发现癌变的高危个体，对开展针对性预措施，降低宫颈癌患病率，是目前研究的热点与难点[5]。鉴于此，选取汉中市人民医院门诊及住院部的宫颈病变患者200例，对宫颈活检组织中P16UK4A/Ki-6蛋白表达情况进行研究，以探讨P16UK4A/Ki-6共表达与宫颈上皮内瘤样变发生发展的关系，具体报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年至2018年在汉中市人民医院行宫颈活检的标本200例，其中病理诊断为慢性宫颈炎43例，平均年龄(42.38±2.13)岁、CINⅠ级39例，平均年龄(41.22±3.56)岁、CINⅡ级41例，平均年龄(39.89±2.45)岁、CINⅢ级39例，平均年龄(43.12±3.58)岁、宫颈癌38例，平均年龄(40.78±3.14)岁，经HE染色切片确认病理诊断后，取病变组织用10%中性福尔马林液固定后石蜡包埋、制作成蜡块后室温保存，进行免疫组化染色测定P16UK4A、Ki-67基因的蛋白阳性表达。

1.2 免疫组化染色

将制作好石蜡切片(厚4 μm)置58 ℃烤箱，24 h后采用常规二甲苯脱蜡，进行S-P法免疫组化染色。鼠P16UK4A单克隆抗体、兔Ki-67多克隆抗体及S-P试剂盒购自丹麦 Dako公司。

1.3 结果判断

P16UK4A、Ki-67无着色或仅基底、基底旁着色视为阴性；阳性细胞垂直分布于宫颈上皮、超过基底及基底旁范围(1/3及以上者)评定为阳性。所有标本均经两位组织病理学专业医师进行结果判读，结果不一致者再经第三位医师阅片后确定。

1.4 统计学处理

应用SPSS 22.0统计软件进行数据分析，计数资料以率或构成比表示，数据处理采用卡方检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

P16UK4A/Ki-67共表达阳性率在慢性宫颈炎、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈癌患者分别为6.98%、15.38%、24.39%、61.54%、76.32%，见表1。阳性率随病变级别升高而增加。经相关性分析，P16UK4A/Ki-67共表达与病变级别Spearman秩相关系数为0.907(F<0.001)，表明P16UK4A/Ki-67阳性共表达与宫颈上皮内瘤变发生发展密切相关。

表1 P16UK4A/Ki-67在各组织中的表达情况(例，%)

注：与慢性宫颈炎组比较，*为P<0.05。

3 讨论

宫颈癌是最常见妇科恶性肿瘤之一，是可以防治的恶性肿瘤[6]。目前认为癌症发生过程是从正常粘膜→炎性改变→低级别上皮内瘤变→高级别上皮内瘤变→癌，宫颈上皮内瘤变是宫颈癌的早期改变，提高可信度较高的CIN分级诊断，能使临床诊治更明确和个性化，从而有效降低宫颈癌的发病率[7-8]。目前确诊宫颈上皮内瘤变的金标准仍是通过HE染色进行病理诊断。但临床上有大量模棱两可的标本不能通过病理诊断进行明确，原因在于病理医师之间的经验不同，据统计学资料显示，不同病理医师对CINⅠ级诊断一致性只有60%，而CINⅡ级诊断的一致性不足更低，不足50%[9]。为了提高病理分级诊断的一致性，专家建议引入特异性强的生化指标作为辅助诊断参考。P16UK4A与Ki-67在宫颈癌组织中高度表达，表达程度与病变程度密切相关，P16为抑癌基因，表达产物是抑制蛋白P16UK4A。当内源或外源癌因素作用于宫颈上皮细胞时，P16基因会发生突变、缺失等变异，刺激细胞分裂，最终成为肿瘤细胞。有研究证明，近半数的原发性肿瘤中都发现P16基因及表达蛋白的明显异常。HPV病毒感染是宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的主要致病因素，通过病毒重组宿主细胞DNA，诱发基因突变，导致癌症的发生[10]。P16作为诊断宫颈病变辅助诊断可信度较高。Ki67存在于细胞增殖活跃的核中，目前是被认为检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标之一[11]。大量研究认为Ki67与宫颈病变程度密切相关，根据其表达阳性程度可进行良恶病变的鉴别。健康宫颈组织中无Ki67表达或低表达，一旦宫颈发生病变的时候，Ki67染色阳性的异型细胞数目便会增多，且细胞数量及异变程度与病变严重程度密切相关。病变级别越高，异型细胞数量越多同时异型性越大。但由于Ki67存在于增殖的细胞中，部分炎性疾病和CINⅠ级宫颈组织中的也可见Ki67阳性表达，因此病理诊断过程容易产生误差。既往研究显示，将P16UK4A、 Ki-67纳入宫颈癌诊断标准可提高诊断准确率[12]，但关于P16UK4A与Ki-67共表达与宫颈上皮内瘤变发生发展的相关研究甚少。

在本研究中，通过观察P16UK4A/Ki-67在不同宫颈病变中共表达阳性率，探究二者之间的相关性，结果显示P16UK4A/Ki-67共表达阳性与宫颈癌发生发展显著相关，可以有效的反映宫颈上皮内瘤变的病变程度，作为筛选癌前病变高危患者的生物指标具有一定意义，值得临床推广应用。