苯磺酸氨氯地平为新型、长效的二氢吡啶Ca2+拮抗剂，通过抑制Ca2+进入心肌细胞，进而对心肌、平滑肌的收缩进行控制，作用于外周血管、肾动脉和冠状动脉，降低外周阻力[1]。目前，该药物已作为治疗高血压、心绞痛的首选药物。由于该药物难溶于血浆，血药水平低，普通检测手段难以测定人体血药浓度[2]。已有研究采用高效液相色谱-串联质谱(high-performance liquid chromatography，HPLC-MS)法检测样品，但只分析了药物的血浆浓度和生物等效性，未明确地分析苯磺酸氨氯地平的生物利用度及治疗效果[3]。为此本研究通过采用HPLC-MS法测定不同苯磺酸氨氯地平片在人体内的相对生物利用度、生物等效性及临床效果进行比较研究。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年3月—2017年3月在我院就诊的原发性高血压病人160例，随机分为左旋组与络活喜组，每组80例。左旋组：男48例，女32例；年龄(49.6±13.6)岁。络活喜组：男46例，女34例；年龄(50.2±10.8)岁。两组年龄、性别等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 纳入和排除标准

1.2.1 纳入标准 ①使用超声动态血压监测仪检测血压值：收缩压≥140 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，舒张压≥90 mmHg；②高血压的诊断采用2016年中国高血压治疗指南建议的标准[4]；③获得研究对象的知情同意及医学伦理委员会的批准。

1.2.2 排除标准 ①肾功能异常，钠、钾代谢异常者；②近期(3个月内)使用降压药、糖皮质激素、免疫抑制剂、抗菌药物、降血脂药物；③合并严重的肝功能损害、消化道活动性出血疾病；④有药物过敏史。

1.3 实验药品、试剂与仪器 苯磺酸左旋氨氯地平片[规格：2.5 mg×7片×2板；批号：国药准字H19991083；施慧达药业集团(吉林)有限公司]。苯磺酸氨氯地平片(商品名：络活喜，规格：每片5 mg，批号：国药准字H10950224，辉瑞制药有限公司)。对照品：中国药品生物制品检定所检定的苯磺酸氨氯地平，其纯度为99.9%。内标对照品：广东华南药业集团有限公司生产的尼莫地平片剂，含量为99.7%。分析中使用的甲醇、乙腈均为色谱纯标准，其余实验试剂均为分析纯。实验仪器主要为：超高效液相色谱分析仪(UPLC，安捷伦公司)，液相色谱-质谱联用仪(LC-MS美国Waters公司)。

1.4 血液收集和血药浓度检测方法

1.4.1 血样处理 病人每次用药时分别服用苯磺酸左旋氨氯地平片、苯磺酸氨氯地平片，每次用药间隔2周。两组均在给药前1 d 21:00禁食12 h，第2天09:00左旋组单次服用苯磺酸左旋氨氯地平片，2.5 mg；络活喜组单次服用苯磺酸氨氯地平片，2.5 mg；以温开水150 mL送服。服药2 h后适量饮水，4 h和9 h后进食低脂标准餐。分别于给药后1 h、3 h、5 h、7 h、8 h、9 h、11 h、13 h、16 h、20 h、24 h，在上肢静脉抽血4.5 mL，置于肝素预抗凝EP管中，常温静置30 min，3 500 r/min离心10 min，分离上层血浆约22.5 mL，-40 ℃避光保存备用。精密吸取待测血浆200 μL，加到2 mL离心管后精密加入内标工作液20 μL，涡旋30 s，再加入80 μL饱和碳酸钠溶液，涡旋30 s，然后按照“空白血浆样品处理”方法处理，进行HPLC-MS分析。

1.4.2 色谱条件 选用Welch Ultimate XB-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm，3 μm)；预柱：菲罗门C18保护柱(4 mm×2.0 mm，3 μm)；柱温：40 ℃；流动相：总流速为0.6 mL/min，进样体积为10 μL。乙腈和甲酸铵溶液2 mmol/L(甲酸调至pH 3.0)，梯度洗脱；当乙腈到达90%时保持0.7 min；乙腈从90%下降到30%平衡至4 min，结束分析。

1.4.3 质谱条件 离子检测方式：正离子多反应监测离子检测(MRM)；离子化方式：电喷雾离子化(ESI)；气帘气(CUR)、碰撞气(CAD)、离子源电压(IS)、离子源温度(TEM)、雾化气(GS 1)、辅助加热气(GS 2)、接口加热器(ihe)参数分别为：10 psi(1 psi ≈ 6.9 kPa)、Medium、5.5 kV、500 ℃、50 psi、50 psi、On。苯磺酸氨氯地平检测离子对为409.0/238.0，去簇电压DP为61 V，碰撞能CE为15 V，出室电压CXP为15 V，入室电压EP为10 V；氘代内标检测离子对为413.1/238.3，去簇电压DP为50 V，碰撞能CE为18 V，出室电压CXP为18 V，入室电压EP为10 V[5]。

1.4.4 溶液配制 对照品溶液：甲醇配与两种苯磺酸氨氯地平配制10.0 g/L储备液，用水、甲醇以 1∶1比例将储备液稀释成不同浓度的对照溶液。内标溶液：用甲醇配制1.0 g/L，用水、甲醇以 1∶1比例稀释成100.0 μg/L的内标工作液[6]。空白血浆样品处理：精密吸取空白血浆200 μL，置2 mL离心管中，加入饱和碳酸钠溶液80 μL，涡旋30 s，再加入甲基叔丁基醚1 mL，涡旋混合10 min，于4 ℃ 10 000 r/min离心10 min，吸取上清液800 μL于1.5 mL离心管中，40 ℃氮气吹干，然后用流动相(乙腈-2 mmol/L甲酸铵，50∶50)80 μL复溶，涡旋混合2 min后，于4 ℃、15 000 r/min离心10 min，取上清液10 μL进行LC-MS/MS分析[7]。

1.5 统计学处理 采用DAS 2.0程序对受试者的血浆药学动力学参数进行分析。实验测得Cmax、Tmax的实际值，以梯形面积法计算AUC0-∞=AUC0-tn+Ctn/Ke(tn是最后1次可检测血药浓度的采样时间，Ctn为最后1次可测定样本的药物浓度，Ke为吸收速度常数)；CL/F=D/AUC0-∞(D 为给药剂量，F为相对生物利用度)，Vd/F=CL/(F·Ke)。对Tmax进行非参数检验，对Cmax、AUC的对数转换值进行方差分析和双单侧t检验，以Cmax70%～143%、AUC 80%～125%为判定标准，观察两种不同药物是否具有生物等效性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组临床资料比较 治疗前两组年龄、性别、体质指数(BMI)、吸烟史、饮酒史、糖尿病史、收缩压、舒张压等基本资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

组别例数年龄(岁) 性别(例) 男女BMI(kg/m2)吸烟史(例)糖尿病(例)酗酒史(例)收缩压(mmHg)舒张压(mmHg)左旋组 8049.6±13.6483223.2±2.1423323190.1±28.3130.3±22.5络活喜组8050.2±10.8463423.0±1.9394017191.4±27.8128.3±24.7统计值t=-0.784χ2=0.166t=0.654χ2=0.345χ2=0.661χ2=0.317t=-1.996t=1.683P0.4820.6320.5140.4560.4870.5740.0570.094

2.2 两组不同给药时间血清中血药浓度比较 左旋组和络活喜组在同一用药剂量治疗的情况下，治疗过程中病人血清中血药浓度随时间变化差异无统计学意义(P>0.05)。详见表2。

组别 例数1 h3 h5 h7 h8 h左旋组 801.225±1.3563.485±1.6624.998±2.2336.942±2.8716.667±2.132络活喜组 801.333±1.0333.666±1.5524.779±2.1136.524±2.6636.423±2.036t值-0.215-0.6250.3210.2190.318P>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05组别 9 h11 h13 h16 h20 h24 h左旋组 6.155±1.9985.992±2.0015.512±1.8895.121±1.8474.866±1.8994.789±1.789络活喜组 6.112±2.0235.877±1.9585.333±1.8235.021±1.7954.799±1.6994.721±1.623t值0.3460.3520.3160.3880.3660.395P>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05

2.3 两组给药后主要药动学参数比较 左旋组和络活喜组中病人的血药峰浓度(Cmax)、峰时间(tmax)、半衰期(t1/2)，药时曲线下面积(AUC0-t)等生物等效性比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见表3。

表3 两组给药后主要药动学参数比较

2.4 两组治疗效果及不良反应发生率比较 左旋组经治疗后，76例病人血压稳定在正常值，治愈率为95.00%，治疗过程中有2例病人出现不良反应，不良反应率为2.50%；络活喜组经治疗后，73例病人血压稳定在正常值，治愈率为91.25%，治疗过程中7例病人出现不良反应，不良反应率为8.75%；两组治愈率和不良反应率比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，且左旋组优于络活喜组(P<0.05)。详见表4。

表4 两组治疗效果及不良反应发生率比较 %

3 讨 论

苯磺酸氨氯地平片通过改变药物与受体的结合和解离的渐进性而改变钙离子通道的活性。本品是外周动脉扩张剂，直接作用于血管平滑肌，降低外周血管阻力，从而降低血压[8]。还能通过扩张外周小动脉缓解心绞痛，降低心肌耗氧量[9]。口服后人体吸收缓慢，需要较长时间才能发挥药理学效应，每日1次的服用量，提高血液中的药物含量。本药治疗心血管疾病时，使用剂量低、吸收速度慢，因此血药浓度低[10]。临床采用高效液相色谱-紫外法(HPLC-UV)法无法准确测量血药浓度；高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)法影响因素较多，难以操作；HPLC-MS法则有较高的灵敏度、专一性和准确性，是一种新型的血药分析方法[11]。HPLC-MS法测量血药浓度，操作简便，所需时间短，能够快速精确的测量血药浓度，可保证测定血浆中的低浓度药物含量的准确性，因此该测量方法适合于苯磺酸氨氯地平的药物动力学及生物等效性的分析[12]。

通过HPLC-MS法测量血药浓度，左旋组和络活喜组在同一用药剂量治疗的情况下，左旋组与络活喜组病人血清中血药浓度随时间变化差异无统计学意义，与已有研究结果的结论相一致[13]。两种氨氯地平苯磺酸片的药动学参数比较，差异无统计学意义，表明两组药物的生物等效性无差别。这与已有研究结果表明两种不同的苯磺酸氨氯地平的生物等效性相似的结果相一致[14]。本研究结果显示，左旋组的治愈率为95.00%，不良反应率为2.50%；络活喜组的治愈率为91.25%，不良反应发生率为8.75%，两组比较差异有统计学意义，表明苯磺酸左旋氨氯地平片的治疗效果比苯磺酸氨氯地平片好，且能够降低不良反应发生率。

本研究中采用HPLC-MS法测量血药浓度，对比分析两组病人的血药浓度到达峰值的含量和药学动力参数，充分表明不同产地的苯磺酸氨氯地平的生物利用程度存在差异，但生物等效性基本相一致。通过对比分析两组病人的治愈率及不良反应发生率，可判断不同产地药物的临床效果，选择效果更好的药物以供临床广泛使用。已有的研究只分析了两种药物的生物等效性及生物利用程度，未对两种药物的临床效果进行分析[15]。说明本研究的方法优于以往的研究方法。

本研究表明不同苯磺酸氨氯地平片在各组人体中的血药浓度、相对生物利用度无明显差异，且生物等效性相同。左旋组的治愈率和不良反应率优于络活喜组。