张寅斌， 陈银溪， 马宇光， 刘 棣， 梁 亮， 王 梦， 孙诗雨， 张淑群

西安交通大学第二附属医院内科，陕西 西安 710000

肝癌作为常见的恶性肿瘤，具有易转移、易复发等特点，肝癌细胞从原来的位置脱落，通过微循环系统进入临近或远端组织，通过恶性增殖形成新的病发灶[1]。肝癌转移与基因的表达调控有关，人们已经发现多种与肝癌发生和转移有关的调控基因，通过影响这些基因的表达可以阻碍肝癌的进展和转移[2]。miRNA是近年来研究较多的非编码RNA，其可以通过靶向调控基因的表达发挥作用，miRNA在细胞生长、分化、代谢等过程中均扮演关键角色[3]。miR-421是目前发现的与肿瘤进展有关的miRNA，其在多种肿瘤组织如胃癌、胶质瘤、骨肉瘤等组织表达上调，且可以调控肿瘤细胞的增殖和迁移过程[4-6]。有研究显示，miR-421在肝癌中高表达，可能参与肝癌进展和转移[7]。本实验探讨下调miR-421对肝癌细胞增殖和迁移的作用和靶向调控机制，为靶向基因治疗肝癌提供新思路，为研究miR-421在肿瘤进展中的调控网络提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料MXC207正常肝细胞L02购自上海美轩生物科技有限公司；ab73734 MMP-9抗体购自美国Abcam；Sirt3 siRNA、siRNA control、Inhibitor control、miR-421 inhibitor、miR-421 mimics、mimics control均由苏州吉玛基因股份有限公司构建合成；BNCC337690肝癌细胞Huh7、BNCC338070 HepG2、CRL-2234 SNU-449、BNCC338089 SMMC-7721购自美国ATCC；引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成；sc-53630 MMP-2抗体购自美国Santa Cruz Biotechnology；突变型荧光素酶报告载体(mut)和野生型荧光素酶报告载体(wt)由中洪博元生物技术有限公司构建；Sfk11443 Sirt3抗体购自上海士锋生物科技有限公司。Sirt3 siRNA序列为：5′-AAGGTGGAAGAAGGTCCATAT-3′。

1.2 RT-PCR方法测定肝癌细胞中miR-421表达收集肝癌细胞Huh7、HepG2、SNU-449、SMMC-7721和正常肝细胞L02，在细胞中分别添加Trizol试剂，常规方法提取各细胞中的RNA。……