曹 卉， 熊枝繁

华中科技大学同济医学院附属梨园医院消化内科，湖北 武汉 430077

目前对于炎症性肠病(inflammatory bowel disease, IBD)的发病机制仍知之甚少。但是，有研究表明，克罗恩病(Crohn’s disease, CD)发病机制涉及肠微生物、机体免疫系统、遗传、环境因素之间的相互作用[1]。IBD的动物模型中基因工程改造的模型是白细胞介素10缺陷(IL-10 KO)的小鼠，其表现类似于人类CD[2]。IL-10是一种在肠道中维持免疫稳态的关键细胞因子，可以抑制调节性T 细胞发挥作用[3]。同时，在IL-10 KO 模型中，结肠炎发展依赖于环境中的微生物。在无菌或严格的SPF 条件下IL-10 KO小鼠不会发生结肠炎[4]。黏附侵袭性大肠杆菌 (adherent-invasive Escherichia coli, AIEC)在IBD的发病中起一定作用，特别是在CD的发病中。AIEC在CD患者肠黏膜的检出率明显升高(51.9%)，而健康对照组是16.7%[5-6]，提示AIEC参与了CD的发病。且AIEC与其他来自肠道的致病性大肠杆菌菌株不同，因为它们不含有毒力基因[7]。 AIEC具有以下特点：(1)可以黏附并侵入Caco-2或Int-407肠上皮细胞表面；不含已知致病基因；(3)能在吞噬细胞内存活并繁殖[5, 8-9]。 AIEC侵入肠上皮细胞和巨噬细胞，并能在细胞内复制，分泌TNF-α而不会诱导感染的巨噬细胞死亡[10]。

本实验选择病理学特征与人类CD十分相似的IL-10 KO小鼠作为IBD模型，用从CD患者肠黏膜分离出的一株AIEC给小鼠进行灌胃, 观察小鼠肠道炎症水平的变化。

1 材料与方法

1.1 材料纯合型IL-10 KO小鼠(C57)及对照组(wild type, WT)小鼠(C57)均购自武汉大学动物实验中心。实验小鼠饲养于SPF条件下，给予灭菌的标准饮食，小鼠随意饮食。AIEC是从1例CD患者肠黏膜标本上分离出。分离方法是按照 Darfeuille-Michaud等的方法，对从患者肠黏膜上分离出的大肠杆菌进行侵袭力鉴定、黏附性鉴定、细菌吞噬细胞内存活鉴定和毒力基因的鉴定，确定其为AIEC[5]。……