杨旭颖 安丽君

摘要：表皮毛是由高等植物地上部组织表皮细胞发育而来的一种特殊结构，细胞周期调控因子在植物表皮毛细胞形态的建成过程中发挥着重要作用。利用原核表达系统，构建pET-28a-KRP2-FLAG融合表达载体，在大肠杆菌中对拟南芥细胞周期依赖激酶抑制因子KRP2进行了体外表达，并利用蛋白标签FLAG和His对目的蛋白进行纯化。结果表明，在大肠杆菌系统中成功对KRP2-FLAG进行了体外表达并得到了纯化的蛋白，蛋白量为0.87 mg。这为进一步研究KRP2在表皮毛细胞发育过程中的作用奠定了基础。

关键词：表皮毛;细胞周期调控因子;KRP2;原核表达;FLAG标签;His标签;蛋白纯化;拟南芥;基因克隆;重组蛋白

中图分类号： Q78;S188+.2  文献标志码： A  文章编号：1002-1302（2019）12-0063-03

植物表皮毛是植物地上组织表皮细胞形成的一种特化结构，与表皮铺板细胞持续进行有丝分裂不同，表皮毛细胞在命运决定之后将退出有丝分裂周期转而进入核内复制。在模式植物拟南芥中，成熟的叶片表皮毛细胞需要经历4次核内复制，从而使其核内DNA含量达到32C，进而形成特定的形态[1]。细胞周期调控因子在细胞由有丝分裂向核内复制转换的过程中发挥着关键的调节作用，其中细胞周期素依赖性激酶（CDK）是植物细胞周期的中心调控因子，细胞周期的一些进程是通过调节CDKs活性进行的[2]。与细胞周期素相对的是CDK抑制因子，它通过与CDKs直接结合负调控CDKs活性[3]。植物中第1种CDK抑制因子是由7种基因共同编码的kip相关蛋白家族（KRP）：ICK1/KRP1、ICK2/KRP2、KRP3、KRP4、KRP5、KRP6、KRP7。ICK1/KRP1、ICK2/KRP2、KRP6过表达强烈抑制生长并且影响器官形态建成。……