张翠真， 袁小龙， 陈志和， 毛振方， 简少卿,2， 赵大显，2

(1. 南昌大学 生命科学学院， 南昌 330031； 2. 江西省水产动物资源与利用重点实验室， 南昌 330031)

核酸的分子生物学技术是进行病原微生物检测、物种鉴定、物种起源、多样性评估及其亲缘关系、系统进化等常用研究手段之一。能否提取出高质量的核酸则是分子生物学实验中的关键，提取方法的灵敏度、特异性也将直接关系到后续试验的成败。因此，核酸提取是分子生物学最关键的方法之一[1]。

随着分子生物学的广泛应用，对核酸提取技术也提出了新的要求，高效、便捷、环保、大通量、自动化成为核酸提取技术发展的主流方向。从第1代化学法[2-6]，如酚-氯仿法、Trizol法，到第2代吸附柱法[2]，以及近年发展起来的第3代磁珠法[7-11]，其提取技术和效率不断地改进优化。

本研究通过纳米磁珠法提取纯化细菌基因组DNA、总RNA和质粒DNA，并与试剂盒法和Trizol法提取效果进行比对分析，以期获得最佳的提取方法，为核酸提取技术提供理论数据。

1 材料与方法

1.1 材料

SanPrep柱式质粒DNA小量抽提试剂盒、SanPrep柱式DNA胶回收试剂盒、SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒购自上海生工，Universal Genomic DNA Extraction Kit购自Takara，Trizol试剂购自ABI。细菌 RNAOμT购自北京天恩泽基因科技有限公司。

PCR所需引物序列上游(5′-CAATATCAGCGATGCCGAACGTAT-3′)和下游引物(5′-TACCATCACCTACCACCGAGATAA-3′)均由上海生工合成。

1.2 方法

1.2.1 细菌基因组DNA提取

试剂盒法按照Universal Genomic DNA Extraction Kit说明书要求操作。

纳米磁珠法提取大肠杆菌基因组DNA：取2 mL大肠杆菌DH10B(E.coliDH10B)培养液，9000 r/min离心，加入500 μL Lysis buffer II，混匀，室温裂解5 min，加入200 μL氯仿/异戊醇(24∶ 1)，振荡30 s，13 000 r/min离心5 min；取200 μL上清液加入200 μL磁珠悬液，振荡混匀，室温吸附5 min，静置 20 s，吸出上清液；……