曹晓俊，梅全喜，高玉桥，林慧，胡莹，彭丽华，成金乐

1.中山市中智药业集团有限公司，广东 中山 528437；2.广州中医药大学附属中山医院，广东 中山 528401

红参为五加科植物人参Panax ginsengC.A.Mey.的栽培品经蒸制后的干燥根和根茎，其功能主要为大补元气，复脉固脱，益气摄血，用于体虚欲脱，肢冷脉微，气不摄血，崩漏下血。红参破壁饮片为将红参传统饮片经现代粉碎技术加工至D90＜45μm（300目以上）的粉体，通过诱发自身物质的黏性，制成的30～100目均匀干燥颗粒状饮片。其服用方式灵活多样，可如传统饮片一样煎煮服用，也可如冲剂冲泡服用，还可如咖啡制备成混悬液全成分服用。

由于中药破壁饮片经破壁粉碎加工，原传统饮片的细胞结构被粉碎破坏，使细胞内化学成分的溶出量大大提高，有利于提高有效成分的利用率，但同时其他成分的加速释放则可能放大潜在的不良反应和毒副作用。另外，与传统饮片煎煮服用的汤剂相比，中药破壁饮片的全成分服用方式，造成吸收进入人体的化学成分更充分，也可能产生与传统饮片不一样的药效或毒性反应。因此，有必要开展破壁饮片与其传统饮片的有效性和安全性比较研究，并探索量效关系和量毒关系，从而为中药破壁饮片的安全、临床有效应用提供基础科学依据。本项目以红参品种为研究对象，以最大给药量法考察红参破壁饮片与其传统饮片的急性毒性差异；以不同剂量的红参破壁饮片与其传统饮片的抗疲劳、耐缺氧和耐低温的药理药效差异比较，评价两种形式饮片的有效性差异[1-3]。

1 材料

1.1 动物

NIH小鼠，体重为20 g～22 g，由广东省医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（粤）2008-0002，粤监证字2008A022。

1.2 药品及配制

红参破壁饮片和红参传统饮片（中山市中智药业集团有限公司）；人参茎叶总皂苷片（沈阳东昂制药有限公司，批号：20090401，每片含人参茎叶皂苷为25 mg）。

药效试验药品配制方法：红参破壁饮片，加入蒸馏水研磨配制成可灌胃给药的不同浓度的混悬液；红参传统饮片，按照传统中药煎煮方法煎煮（加水量为刚好没过药面约5 cm，煎煮1.0小时后以纱布过滤药液，药渣再加蒸馏水煎煮0.5小时，过滤药液），浓缩2次滤液成一定浓度的汤剂浓缩液。阳性对照药（人参茎叶总皂苷片），给药前将药片研磨成细粉状，并用生理盐水调匀成含人参茎叶皂苷29 mg/mL的药液。

急性毒性试验药品配制方法：红参破壁饮片，加入蒸馏水研磨配制成0.298 g生药/mL的混悬液（最大质量浓度）；红参传统饮片，煎煮浓缩成2.27 g生药/mL的浓缩液（最大质量浓度）。

2 方法

2.1 抗疲劳作用比较研究[4-6]

选取NIH小鼠70只，随机分为7组，每组10只，均雌雄各半：正常对照组（生理盐水组）、阳性对照组（人参茎叶皂苷58 mg/kg小鼠）、红参传统饮片组（2.34 g生药/kg小鼠）、红参破壁饮片等剂量组（2.34 g生药/kg小鼠）、红参破壁饮片1/2剂量组（1.17 g生药/kg小鼠）、红参破壁饮片1/4剂量组（0.59 g生药/kg小鼠）、红参破壁饮片1/8剂量组（0.29 g生药/kg小鼠）。各试药组动物均按0.1mL/10 g小鼠剂量连续灌胃给药7天，正常对照组给予等体积生理盐水。末次给药60分钟后，每只小鼠尾部捆绑相当于自身体重10%的重物后将小鼠置于水温（20±0.5）℃，水深20 cm的恒温水箱中强制游泳，从小鼠入水时起至沉到水底无力向上冲起时为止记为小鼠持续游泳时间。

2.2 耐缺氧作用比较研究[5-7]

选取NIH小鼠70只，随机分为7组（分组同前），每组10只，均雌雄各半。各试药组动物均按0.1 mL/10g剂量连续灌胃给药3天，正常对照组给予等体积生理盐水。末次给药后1小时，将小鼠置于250 mL盛有钠石灰20 g的磨口广口瓶内，每瓶放1只，于瓶口涂凡士林，将盖盖严以造成瓶内氧气逐渐减少，而形成缺氧环境，密封同时记录时间，观察在缺氧应激状态下小鼠的活动，直至死亡，以呼吸停止为判断死亡指标，记录各小鼠的存活时间。

2.3 耐低温作用比较研究[7-8]

选取NIH小鼠140只，随机分为7组（分组同前），每组20只，均雌雄各半。各试药组动物均按0.1 mL/10 g剂量连续灌胃给药7天，正常对照组给予等体积生理盐水。末次给药30分钟后，将小鼠放入（-18±1）℃冰箱中，每隔1小时开冰箱检查1次（出现动物死亡后改为每30分钟开冰箱检查1次），拾出死亡动物，记录3.5小时内动物死亡数，以各组动物的死亡率作为比较指标，比较各组小鼠的耐低温能力。

2.4 急性毒性比较试验[1-3]

取NIH小鼠90只，雌雄各半，按性别随机分为正常对照组、红参破壁饮片组和红参传统饮片组，30只/组（雌雄各半），给药前禁食不禁水6小时，给药后禁食4小时。试药组以最大给药量法单次灌胃给药：红参破壁饮片组按0.032 mL/g最大容积灌胃给予0.298 g生药/mL的混悬液；红参传统饮片组按0.032 mL/g最大容积灌胃给予2.27 g生药/mL的药液；对照组按0.04 mL/g给予蒸馏水。灌胃后连续观察14天，记录动物的体重、精神状态、毛发、自主活动、摄食量、粪便、口鼻分泌物等一般状况，并记录动物的不良反应和死亡情况。实验结束时颈椎脱臼处死小鼠，解剖和肉眼观察重要脏器颜色及形态学改变情况。

2.5 数据处理

采用SPSS 13.0统计软件处理，进行单因素方差分析及组间t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 抗疲劳作用比较

结果如表1所示：与红参传统饮片组相比，等剂量的红参破壁饮片组动物存活时间显著延长（P＜0.05），即等给药剂量下，破壁饮片对小鼠抗疲劳的作用比其传统饮片更显著（P＜0.05）；与传统饮片比较，其1/2、1/4和1/8剂量的破壁饮片具有同等的抗疲劳作用。

表1 红参破壁饮片及其传统饮片对小鼠抗疲劳试验的影响 （±s，n=10）

表1 红参破壁饮片及其传统饮片对小鼠抗疲劳试验的影响 （±s，n=10）

注：与红参传统饮片组比较，*P＜0.05。

组别正常对照组阳性对照组红参传统饮片组红参破壁饮片等剂量组红参破壁饮片1/2剂量组红参破壁饮片1/4剂量组红参破壁饮片1/8剂量组存活时间（min）2.12±1.32 4.55±2.50 4.56±1.59 7.78±1.58*5.00±1.42 3.54±1.70 3.93±1.92

3.2 耐缺氧作用比较

结果如表2所示：同等给药剂量相比，破壁饮片延长小鼠常压缺氧存活时间的作用比其传统饮片更显著（P＜0.05）；与传统饮片比较，其1/2、1/4、1/8剂量的破壁饮片均具有同等的提高小鼠耐缺氧作用。

表2 红参破壁饮片及其传统饮片对小鼠常压缺氧存活时间的影响 （±s，n=10）

表2 红参破壁饮片及其传统饮片对小鼠常压缺氧存活时间的影响 （±s，n=10）

注：与红参传统饮片组比较，*P＜0.05

组别正常对照组阳性对照组红参传统饮片组红参破壁饮片等剂量组红参破壁饮片1/2剂量组红参破壁饮片1/4剂量组红参破壁饮片1/8剂量组存活时间（min）29.07±4.06*36.65±3.34 37.12±4.13 43.28±7.89*37.88±4.26 35.99±7.01 37.74±11.30

3.3 耐低温作用比较

结果如表3所示：与红参传统饮片组相比，等剂量的红参破壁饮片能显著降低小鼠死亡率（P＜0.05），即同等给药剂量下，破壁饮片提高小鼠耐低温的作用比其传统饮片更显著（P＜0.05）；与传统饮片比较，其1/2剂量的破壁饮片具有同等的药效作用。

表3 红参破壁饮片及其传统饮片对小鼠耐低温作用的影响

3.4 急性毒性比较

与正常对照组比较，红参破壁饮片组和红参传统饮片组动物灌胃给药后，大部分动物均出现活动减少，神情倦怠，除此以外，未见其他明显异常反应；1～3小时后，动物基本恢复正常，与正常对照组比较，无明显异常。3小时后，各组动物的精神状态良好、毛色光洁、活动自如、呼吸均匀、摄食量、粪便未见明显异常、口鼻内无异常分泌物，无动物死亡。在给药前、给药后第3、第7和第14天，分别对动物进行称重，各时间点动物体重均无明显组间差异，见表4。

实验结束时颈椎脱臼处死小鼠，解剖并肉眼观察，主要脏器颜色及形态学无改变。实验数据显示，红参破壁饮片组的小鼠最大给药剂量为9.5 g生药/（kg·d），换算成人体用量为1.05 g生药/（kg·d），红参传统饮片的小鼠最大给药剂量为72.6 g生药/（kg·d），换算成人体用量为8.0 g生药/（kg·d），均无急性毒性反应产生。红参传统饮片的成人（体重60 kg）临床推荐用量为3.0～9.0 g生药/d，即成人推荐用量为0.05～0.15 g生药/（kg·d）。由此可见，以最大给药量法对小鼠灌胃给药红参破壁饮片（剂量相当于其传统饮片临床用量的7～21倍），未出现急性毒性反应。

表4 红参破壁饮片及其传统饮片急性毒性实验观察结果 （±s，n=30）

表4 红参破壁饮片及其传统饮片急性毒性实验观察结果 （±s，n=30）

组别正常对照组红参破壁饮片组红参传统饮片组动物数（n）30 30 30死亡数（n） 体重/g 0 0 0给药前21±1.2 21±1.1 20±1.3给药后3天23.8±2.2 24.6±1.6 22.5±1.4给药后7天29.9±2.9 30.1±1.3 29.7±1.2给药后14天37.2±3.2 36.3±1.8 36.5±1.3

4 讨论

4.1 研究结果小结：综合红参破壁饮片与传统饮片的3个药效比较研究和急性毒性试验结果，表明：①红参破壁饮片和传统饮片均有耐缺氧、抗疲劳和耐低温的作用；②同等剂量下，红参破壁饮片耐缺氧、抗疲劳和耐低温的作用比其传统饮片更显著；③与传统饮片比较，其1/2剂量的破壁饮片具有同等的功效作用；④以相当于其传统饮片临床最大用量的7倍剂量服用红参破壁饮片时，未出现急性毒性反应，也未出现毒性反应大于其传统饮片。

4.2 研究样品制备及给药方式：本试验红参破壁饮片由同批次的传统饮片制备而成，可减少原料批次差异带来的试验误差，保证试验的平行可比；红参破壁饮片的推荐应用方式为全成分服用（冲泡连渣服用或制成咖啡状混悬液服用），而红参传统饮片的习惯应用方式为煎煮成汤剂服用，所以为保证试验的准确性，本项目在开展药效和安全性评价试验时，给受试小鼠服用的样品也尽量模拟实际应用方式而制备（破壁饮片制备成混悬液服用；传统饮片制备成汤剂服用）。

4.3 剂量的设置：本试验在设置不同剂量的组别时考虑了中药药效作用双向调节的特点以及中药破壁饮片的成分利用率提高对应用剂量的影响，所以试验组除了设置与传统饮片的等剂量组以外，还设置了能反映中药破壁饮片减少服用剂量的低剂量组别。