莫建梅 刘莺燕 李庆国

摘要：利用目标起始密码子多态性（start codon targeted polymorphism，简称SCoT）和巢式（Nested）PCR 2种分子标记技术建立“龙头凤尾”铁皮石斛DNA分子鉴别的方法，并研究其复方制剂的降血糖作用。用SCoT标记设计1对引物SC3，开发特异性检测“龙头凤尾”铁皮石斛的Nested PCR方法，建立分子鉴别质量标准;利用鉴别后的石斛制备复方胶囊，对链脲佐菌素加高脂饲料复制的胰岛素抵抗/脂代谢紊乱型糖尿病大鼠进行降血糖药效学研究，观察其对模型大鼠空腹血糖、糖耐量、血清胆固醇、胰岛素等的影响。结果显示，用设计的特异性引物SC3对其进行SCoT-Nested PCR扩增后，僅在睿绅2号中扩增出1条清晰的目标条带，而在其他铁皮石斛品种中均没有出现目标条带，从而实现特异性鉴别。其复方石斛胶囊降血糖作用的规律为：与正常对照组比较，造模组大鼠血糖水平、血糖曲线下面积、总胆固醇含量显著增加（P<0.01），血清胰岛素含量显著减少（P<0.01）;与造模组比较，复方胶囊高、中剂量组大鼠血糖水平、血糖曲线下面积、总胆固醇含量显著减少（P<0.05），大鼠体质量、血清胰岛素含量显著增加（P<0.05）。说明SCoT-Nested PCR分子标记可以利用1对引物SC3对“龙头凤尾”铁皮石斛睿绅2号进行特异性鉴别;其制备的复方胶囊高、中剂量组对链脲佐菌素加高脂饲料致胰岛素抵抗糖/脂代谢紊乱型模型大鼠具有一定的降血糖作用，增加胰岛素分泌，降低血清胆固醇含量。能够提高该品种石斛的质量标准，其制剂产品具有较好的降血糖作用。

关键词：“龙头凤尾”铁皮石斛;SCoT标记;Nested PCR;降血糖;基因鉴别

中图分类号： S567.23+9.01;R285 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2019）01-0182-04

铁皮石斛为兰科石斛属多年草本附生植物，富含多糖、生物碱等成分[1]，能增强胰岛素活性和降低糖尿病患者血糖作用[2]。传统的石斛鉴定是基于形态学、解剖学和化学分析的传统方法，以形态、感官为主，如茎粗、质量、嚼之黏牙、味甘、无渣等为指标[3-4]，但这些传统方法并不能完全反映药材的内在质量，很难从幼苗或干茎中鉴定石斛属物种，也不利于产业管理的规范化。近年来，随着DNA分子标记技术的发展，应用这些技术鉴定石斛品种得到了迅速的发展[5]。……