王玲， 蔡岳华， 焦荣华， 贺百花， 阳宁

1湖南环境生物职业技术学院医药技术学院(湖南衡阳 421001)； 2南华大学附属第二医院泌尿外科(湖南衡阳 421001)

乳腺癌是一种乳腺上皮组织恶性肿瘤，发病率高，对女性身心健康危害大。化疗是乳腺癌治疗的主要手段，但易产生耐药性，从而降低药物的疗效，甚至导致治疗失败[1-2]。因此，深入阐明乳腺癌耐药性的产生机制，并从中寻找关键性的靶点，对逆转耐药性及提高临床疗效具有重要的意义。Akt又称为蛋白激酶B，被磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase, PI3K)激活后，可促进肿瘤细胞增殖、侵袭、转移及耐药性的产生[3-6]。近年研究表明，Akt失调与乳腺癌发生发展密切相关，被认为是肿瘤预后不良的一个独立预测因子[7-8]。阿霉素(adriamycin, ADM)是乳腺癌化疗的常用药物，但Akt在乳腺癌ADM化疗耐药中的作用尚待研究。2017年6月至2018年5月，本研究首先观察Akt在人乳腺癌细胞ADM敏感株(MCF-7/S)和耐药株(MCF-7/ADM)中的表达和活性，然后用小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)技术沉默MCF-7/ADM细胞中Akt表达，探讨其对ADM耐药性的影响及分子机制，从而为抑制乳腺癌细胞多药耐药提供一个新的靶点。

1 材料与方法

1.1 细胞、药物与主要试剂 MCF-7/S和MCF-7/ADM细胞由中山大学肿瘤医院提供，来源于美国国立癌症研究所。ADM为深圳万乐药业有限公司产品。新生胎牛血清以及DMEM培养基购于Gibco公司提供。Akt小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)和阴性对照 siRNA由上海吉玛公司合成。LipofectamineTM2000和PVDF膜购于美国Invitrogen公司。兔抗人Akt、磷酸化Akt(phosphorylated Akt, p-Akt)、Bcl-2、Bax、P-gp及β-actin单克隆抗体购自美国Santa Cruz 公司。RIPA蛋白裂解液和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG购于上海碧云天生物技术有限公司提供。……