樊青峰

摘要    以银雀花的茎段为外植体，通过对不同基本培养基、不同植物生长调节剂种类和浓度的筛选，建立银雀花的组织培养再生体系，为银雀花的组织快繁提供技术指导。结果表明，初代培养宜选用培养基MS+1.2 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA;最佳增殖培养基为MS中添加0.4 mg/L TDZ，诱导形成 4～5个丛生芽，将嫩茎接种在添加0.75 mg/L NAA的1/2 MS培养基中，生根率为83.0%。

关键词    银雀花;组织培养;再生体系;山东临沂

中图分类号    S688        文献标识码    A        文章编号   1007-5739（2019）12-0103-01

金雀花、银雀花是临沂市两大地方性花卉，也是与金雀山和银雀山地名相匹配的名优特色花卉，与临沂历史文化紧密相连。金雀花、银雀花在临沂市种植历史悠久[1]，但是由于种种原因已濒临灭绝。由于近年来绿色食品和食花文化的兴起，对金雀花、银雀花及其种苗的需求与日俱增，因人为采摘花朵及环境影响等导致其结实率低，而分株和扦插繁殖系数也低，无法满足市场需求。目前，仅对金雀花食用价值、药物成分、栽培管理和组织培养开展了研究[2-5]，但对于银雀花组织培养的报道极少。因此，本文研究不同植物生长调节剂种类和浓度诱导丛生芽，建立银雀花组织培养再生体系，以期实现种苗快速繁育，满足临沂地方花卉产业种苗需求。

1    材料与方法

1.1    试验材料

分别于2016年4月和5月在临沂市农业科学院试验基地多年生的银雀花上采取半木质化枝条作为试材。

1.2    试验方法

1.2.1    材料灭菌。剪取银雀花生长健壮的枝条，流水冲洗30 min，然后在超净工作台上用75%乙醇处理10 s，再用0.5%次氯酸钠灭菌15 min，无菌水冲洗3～4次。将材料切成带腋芽的长1.0 cm茎段，每个茎段带1个腋芽，接种到诱导培养基。

1.2.2    初代培养。试验采用3因素3水平正交設计，研究基本培养基和植物生长调节剂对初代培养的影响。基本培养基为 MS、WPM和LP;植物生长调节剂为6-BA 0.4、0.8、1.2 mg/L;NAA 0.05、0.10、0.15 mg/L。每个处理接种外植体10 个，3次重复，30 d时统计成活率。成活率（%）=（成活外植体/接种总数）×100。

1.2.3    无菌苗增殖培养。基本培养基为MS，在培养基中分别添加TDZ 0、0.2、0.4、0.8、1.0 mg/L，然后均添加0.15 mg/L NAA，研究不同浓度的TDZ对增殖的影响。外植体10个，重复3 次，30 d时统计增殖系数。增殖系数=增殖后的总芽数/接种芽数。

1.2.4    生根培养。在1/2 MS培养基中分别添加0、0.25、0.50、0.75、1.00 mg/L NAA，研究不同质量浓度的NAA对生根的影响。每个处理接种外植体10个，先暗培养7 d后再转入光下培养。3次重复，30 d时统计生根率。生根率（%）=（生根芽数/接种芽数）×100。

培养条件：除生根培养基添加20.0 g/L蔗糖外，其余添加30.0 g/L蔗糖;均添加6.0 g/L琼脂，pH值5.6～5.8。光照时间为12 h/d，光照强度为2 000 lx，培养温度为（25±1）℃。

2    结果与分析

2.1    基本培养基和植物生长调节剂对茎段腋芽萌发诱导的综合影响

将材料切成带腋芽的长1.0 cm的茎段消毒后接种到不同的诱导培养基上，10 d后即可萌发，30 d后统计萌发率。MS成活率最高，平均成活率为45.9%，MS培养基上生长的芽粗壮;在WPM和LP上的萌发效果基本相同，平均成活率分别为35.6%和35.1%，生长后期小叶有黄化脱落现象。从表1可以看出，在MS培养基添加0.15 mg/L NAA和1.2 mg/L 6-BA腋芽的成活率最高，为58.5%，且差异显著。

2.2    不同浓度TDZ对增殖的影响

将诱导的腋芽新梢切下，转接到增殖培养基上。试验结果（表2）表明，无菌苗随着TDZ浓度的增加，增殖系数呈上升趋势，并生成了丛生芽;但当TDZ浓度达到0.8 mg/L时，增殖系数为4.8，出现玻璃化现象;当TDZ浓度达1.0 mg/L，基部愈合组织多，不定芽生长缓慢。因此，增殖培养基中添加0.4 mg /L为TDZ最佳浓度。

2.3    不同浓度 NAA 对无菌苗生根的影响

试验结果（表3）表明，在NAA质量浓度为0.25～1.00 mg/L范围内，随着浓度升高，生根率上升;在0.75 mg/L时，诱导根系粗壮，平均根数为3.6条，差异显著。当NAA为1.0 mg/L时，生根率较高，但基部形成大量愈合组织，生根倍数有所下降，不利于后期生长。

3    结论与讨论

银雀花组培快繁过程中，选择合适的基本培养基是组培快繁成功的关键之一[6]。本试验结果表明，初代培养以MS+1.2 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA培养基为宜，可以获得较高的成活率。在增殖培养过程中，在一定范围内，TDZ随着浓度的增加，有利于增殖，并较好诱出丛生芽;在0.4 mg/L的条件下TDZ增殖效果最好，增殖系数可达4.5;但浓度过高反而抑制芽的再生，导致芽苗玻璃化等现象。生根以1/2 MS基本培养基中添加0.75 mg/L NAA生根效果最好。

4    参考文献

[1] 张谦，刘延刚，彭金海，等.临沂市金雀花的植物学特性及盆景制作技术[J].农业科技通讯，2013（5）：263-256.

[2] 李洪文.多功能野生物种：金雀花繁苗用丰产栽培技术[J].耕作与栽培，2003（4）：27-28.

[3] 樊建，赵天瑞，李永生，等.野生金雀花营养成分研究[J].昆明理工大学报（理工版），2006，31（2）： 97-99.

[4] 陈家龙，朱建军，吴秀水，等.金雀花组织培养与快繁[J].浙江农林大学学报，2013，30（4）：611-614.

[5] 马青，唐民科.线叶金雀花的研究进展[J].世界科学技术-中医药现代化，2018，20（6）：998-1003.

[6] 陈家龙，朱建军，陈功楷，等.金雀花花期促成栽培研究[J].上海农业学报，2014，30（4）：57-61.