孔明圣，于洋，张亚倩，李玲，张文峰，邵红伟

(广东药科大学生命科学与生物制药学院，广东省生物技术候选药物研究重点实验室，广东 广州 510006)

在有关基因功能的研究中将目标基因导入受体细胞的效率高低对研究结果至关重要，电穿孔是基因传输常用的方法之一，相对于病毒传输系统和其他转染方法，电穿孔具有方便高效，不引入额外的转染介质，潜在副作用更低，适合各类细胞系，原代细胞和干细胞，包括一些常规方法难以转染的细胞，并且已广泛用于体外和体内各种应用，包括基因治疗，伤口愈合和药物筛选等[1-4]。

随着嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T)、T细胞抗原受体(T Cell Receptor, TCR)修饰T细胞(TCR-T)等基于免疫细胞的抗肿瘤研究以及基于免疫细胞基因组编辑技术的广泛应用，目前对于T淋巴细胞等免疫细胞的基因修饰研究越来越多[5-8]。而作为原代细胞，免疫细胞尤其是淋巴细胞的基因传输效率一直是制约相关研究的重要因素。本研究通过摸索各种可能会导致电穿孔转染效率和细胞存活率的因素，对质粒转染人PBMC的电穿孔方法进行了较为详细的分析与探索，为基于淋巴细胞的相关基础研究以及临床应用提供了有益的参考。本研究分析了电穿孔电压、脉冲时间、电转缓冲液、细胞培养状态，质粒质量对转染效率和细胞活率的影响。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

质粒pCMV-GFP(日本NEPA GENE，4 700 bp)；质粒pDC315-GFP(本实验室构建，4 700 bp)；质粒pcDNA3.1-GFP(本实验室构建，7 200 bp)；质粒pMax-E2F1(3 500 bp)、pEB-3xflag-GFP(8 300 bp)、px458_2A_GFP(9 300 bp)均购自Addgene；人外周血(来自本实验室志愿者)；……