侯宇,廖芬芳,刘漫宇,王伟章

(广东药科大学生命科学与生物制药学院/广东省生物活性药物研究重点实验室,广东 广州 510006)

费城染色体阳性(philadelphia chromosome positive,Ph+)急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是最致命的白血病,约占成年人ALL患者的20%以及老年ALL患者的50%[1]。尽管酪氨酸激酶抑制剂改善了这一恶性疾病的预后,但仍然不能彻底治愈该疾病。因此,探索新的Ph+ALL治疗方法仍然十分必要。原癌基因c-myc在细胞增殖、凋亡和分化过程中起着重要的调控作用,其异常表达在包括ALL在内的多种人类肿瘤中屡见不鲜[2]。c-myc蛋白也因此成为了许多肿瘤包括淋巴瘤和白血病治疗的潜在药物靶点[3]。然而,迄今为止c-myc小分子抑制剂抗Ph+ALL的研究却鲜有报道。因此,本研究拟采用c-myc的小分子抑制剂10058-F4作用于Ph+ALL细胞株Sup-B15和原代Ph+和Ph-ALL细胞,通过流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,以及Western bloting检测c-myc及其下游调控基因蛋白的表达,初步探讨10058-F4抗Ph+ALL的作用及机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞培养 Sup-B15细胞购自中国科学院上海分院细胞库。细胞培养于含20%(φ)胎牛血清(美国Gibco公司)的IMDM培养液(美国Gibco公司))中,置于5%(φ)CO2的37 ℃培养箱。ALL患者骨髓样品经淋巴细胞分离液分离获取白细胞,细胞培养于含20%胎牛血清的IMDM培养液中。

1.1.2 一般资料 ALL患者的骨髓样品收集于广东药科大学附属第一医院,均确诊为Ph+和Ph-初发患者,且未接受放、化疗,2名患者均为女性。

1.1.3 主要仪器 FACScalibur型流式细胞仪(美国BD公司) 。

1.1.4 主要试剂 格列卫(imatinib mesylate,IM)和碘化丙啶(propidium iodide,PI)购自美国Sigma公司；PPP和10058-F4购自selleck公司；c-myc、Mcl-1、Bcl-2和Bcl-xl购自美国abcam公司；Bcl-abl、GAPDH、Bcr-abl、p-crkl、辣根过氧化物酶标山羊抗兔和羊抗小鼠IgG抗体购自美国CST公司；……