黄琰菁，王 琳，李 赛，盛 莉，王海霞，杨生辉

(海南省人民医院肿瘤内科，海南 海口 570311)

肝癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，2017年国内癌症数据年报显示，我国肝癌发病率居恶性肿瘤发病的第3位，病死率居第2位[1]。因此，了解肝癌发生、发展的相关机制，寻找新的分子靶点，对于肝癌防治有重要意义。肝癌的发生是一个长期过程，涉及了大量的基因及表观遗传突变[2-3]。有研究证实，长链非编码RNA(long noncoding RNA，LncRNA)在调节细胞增殖、分化与凋亡等生理过程中具有重要作用，LncRNA PCGEM1最初被发现在人前列腺癌LNCaP细胞中过表达，其被认为参与前列腺癌的侵袭和增殖[4-6]，但目前有关LncRNA PCGEM1在肝癌细胞中表达的研究鲜有报道。本研究旨在探讨LncRNA PCGEM1在肝癌细胞增殖、侵袭及凋亡中的作用。

1 材料与方法

1.1 肝癌细胞人肝癌细胞系Huh7细胞购自中国科学院上海细胞研究院，-70 ℃液氮保存于海南省人民医院实验中心。

1.2 主要试剂与仪器空慢病毒载体(上海吉凯基因化学技术公司)，RPMI 1640培养基、胎牛血清、磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution，PBS)、放射免疫沉淀实验(radio immunoprecipitation assay，RIPA)裂解液、胰蛋白酶、TRIzol RNA iso、Takara反转录试剂盒(美国Gibco公司)，Lipofectamine 2000转染试剂(上海双达生物技术有限公司)，细胞计数试剂盒-8 (cell counting kit-8，CCK-8)(美国Abmole Bioscience公司)，Transwell小室试剂盒(美国Novus Biologicals公司)，膜联蛋白(annexin V，AV)-碘化丙啶(propidium iodide，PI)检测试剂盒(美国Yeasen公司)；实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)仪(美国Wealtec公司)，光学显微镜(日本Olympus公司)，流式细胞仪(广州医扬电子商务有限公司)。

1.3 肝癌细胞培养将液氮中储存的肝癌Huh7细胞于室温条件下放置10 min，置于37 ℃水中融化，接种于RPMI 1640培养基内，加入体积分数10%胎牛血清，在培养箱中进行培养，培养期间常规换液，准备后续实验。……