张耀东，姜美娟，刘玉琳，辛 磊，梁 冰

研究不同环境下空气微生物种类的分布及其随环境条件变化而发生的变化规律是卫生微生物学的任务范畴［1］。潜艇在水下航行作业时，舱室相对密闭，空气交换受限，加之作业环境中人员密度大，该环境的生物安全就显得十分重要。前期对该环境的调查显示，长时间封闭使舱室空气中微生物浓度明显升高，微生物的构成也发生了明显变化［2］，这些变化于健康是不利的。该文将从病原学的角度，分析长航前后某潜艇舱室气载微生物变化的意义，旨在能够对评价职业卫生潜在风险及制定生物防御措施有参考价值。

1 资料与方法

1.1 实验条件 航行前：某型潜艇位于码头时可使舱室与外界可进行空气交换。航行后：某型潜艇单次60 d连续航行，航行中不定时与海洋大气进行短暂的空气交换。封舱后舱内温度18～22℃，湿度38%～60%。

1.2 采样点 分别选取采样点5个，涵盖潜艇前中后部以及上、下层空间。

1.3 实验方法及材料

1.3.1 空气微生物采样方法 采用固体撞击式采样，采样高度1.5 m。采集时长5 min，气体流量为28.3 L/min。操作按仪器说明书进行。

1.3.2 细菌学鉴定方法 采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry，MALDITOFMS）技术进行细菌鉴定分类。用灭菌的取菌环挑取适量单个菌落放入1.5 ml Eppendorf管，加入300 μl纯水混匀，再加入900 μl无水乙醇混匀，静置 15 min 后离心（13000 r/min，2 min），弃上清后按推荐的甲酸提取法标准操作流程进行。采用MALDI-TOFMS的鉴定软件MALDI Biotyper RTC进行样品的数据采集和鉴定，质谱仪线性正性模式用频率60 Hz，采集分子量为2000~20000 Da的蛋白质。……