冉旭东 吴远根

摘 要 核酸适配体具有类似蛋白抗体的性质，在靶标特异性识别与检测中引起越来越广泛的关注。小分子物质通常与环境污染和人类健康密切相关，然而小分子物质与核酸文库在性质上差异较小，在筛选过程中没有足够的活性位点，难以固定，因而其核酸适配体筛选难度更大。本研究采用体外合成一条生物素修饰的碱基序列，通过氢键与随机文库3′-末端进行互补配对，将其固定在链霉亲和素修饰的纳米磁珠上。随后，加入不同浓度的百草枯靶分子孵育，洗脱得到百草枯特异性的亲和性ssDNA，对其进行非对称PCR扩增后，得到下一轮筛选所需的富集ssDNA库。经过9轮筛选后，将所得亲和性ssDNA进行克隆测序，最终得到15条百草枯的亲和ssDNA序列。对亲和性序列进行聚类分析和二级结构预测，再根据同源性等条件从中筛选出6条ssDNA序列进行亲和力测定。结果表明，PQ-15序列对百草枯的亲和力最高，解离常数（Kd）为（54±4） nmol/L。最后，利用PQ-15核酸适配体作为百草枯的识别分子，以阳离子化合物聚集的纳米金作为传感信号，建立了基于核酸适配体识别的百草枯农药比色检测方法，检出限为25.2 nmol/L，其它竞争性分子对百草枯检测无明显干扰，实际样品中百草枯的加标回收率为91.1%～99.6%。

关键词 核酸适配体; 百草枯; 筛选; 比色检测; 纳米金

1 引 言

百草枯（1，1-二甲基-4，4-二吡啶二氯）是一种具有双苯环结构、极性很强的有机小分子，是毒性最强的除草剂之一，在水中溶解度极高[1]。由于生产成本较低、除草效率高，因而被广泛应用于农业生产，曾在一些发展中国家广泛使用[2]。……