吴秀秀,蒋 顺,于 峰,曹建中,汪 龙,*

(1.中南林业科技大学食品科学与工程学院/稻谷及副产物深加工国家工程实验室,中国湖南长沙410004;2.湖南大学生物学院,中国湖南长沙410082)

类受体蛋白激酶FERONIA(FER)是CrRLK1-L亚家族的成员之一,能够调控拟南芥生长发育的多个方面[1],为近年来植物研究领域的“明星分子”。FER最早被发现参与拟南芥花粉管发育,在拟南芥fer突变体中,花粉管的生长不能停止且不将其内容物递送到胚囊中,使双受精过程受到影响[2]。FER主要参与的功能有调控细胞伸长[3～4]、免疫反应[5～6]、响应 ABA(abscisic acid)反应[7～9]、参与JA(jasmonic acid)信号调控[10]等。水稻中有16个具有完整胞内外结构域的类受体蛋白激酶FERONIA-like receptor(FLR)家族成员,其中与拟南芥FER同源性最高的成员为FLR1。目前发现FLR1能够通过赤霉素途径来影响水稻株高[11],同时参与调节花粉育性[11～12]。鉴于类受体蛋白激酶FLR在水稻中的研究处于起步阶段,我们将FLR1基因的胞外(FLR1-BW)和胞内(FLR1-BN)结构域分段克隆到不同的蛋白质表达载体上,比较其表达情况,并通过对诱导条件的筛选,选出最优的蛋白质表达及纯化策略,以期获得较高浓度及纯度的FLR1的N端和C端蛋白质,以便用于抗体制备及后续功能研究。本研究为类受体激酶的蛋白质纯化和抗体制备提供了思路,也为后续机制探索提供了基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试材料

植物材料日本晴以及原核表达载体pET-32a、pGEX-4T-1、pET-22b 由湖南大学生物学院提供;pTriEx-4表达载体为本实验室保存;大肠杆菌菌株DH5α和BL21(DE3)购自湖南擎科生物技术有限公司;293细胞购自武汉普诺赛生命科技有限公司;SPF级雄性SD大鼠(250～270 g)由湖南中医药大学中医诊断研究所提供。……