池细俤，高世华，张忠源，刘明杰

(福建医科大学附属南平第一医院 1. 检验科； 2. 儿科，福建 南平 353000)

急性呼吸道感染(acute respiratory tract infec-tion，ARTI)是引起人类尤其是婴幼儿死亡的主要原因之一[1]，据统计，70%～80%的儿童呼吸道感染由病毒引起[2]，常见的呼吸道病毒包括流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒和鼻病毒等。随着检测技术的发展，新的呼吸道病毒不断被发现，如人偏肺病毒、人冠状病毒等[3-5]。呼吸道病毒感染患者症状各异但无特异性，轻者表现为咳嗽、发热和流涕等上呼吸道感染症状，重者表现为下呼吸道感染，可诱发毛细支气管炎、肺炎和哮喘等喘息性疾病并可累及全身各系统，严重者甚至引起死亡。病毒感染情况受时空分布影响较大，不同的病毒也呈现不同的流行趋势。因此，了解呼吸道感染病毒学特点和流行特征，对防治非常重要。本文通过回顾性分析福建医科大学附属南平第一医院2015年3月—2018年2月的 ARTI患者常见7种呼吸道病毒感染情况及其变化趋势，为临床诊治及合理用药提供参考。

1 资料与方法

1.1 资料来源 调查2015年3月—2018年2月福建医科大学附属南平第一医院就诊的 ARTI患者的病历资料。纳入标准：符合急性上呼吸道感染或急性下呼吸道感染诊断标准的患者；排除标准：无病原学检测资料者。

1.2 试剂与仪器 鼻咽拭子由意大利Copan Flock Technologies S.R.L 公司生产；直接免疫荧光法(direct immunofluorescence assay，DIA)试剂盒由美国 Diagnostic Hybrids．INC 公司生产；BX-53荧光显微镜由奥林巴斯公司生产。

1.3 研究方法

1.3.1 样本采集 由经培训的临床医生进行采样操作，将鼻咽拭子的植绒部位插入患者鼻咽管，贴鼻咽壁旋转3～5周采集细胞，采样后将拭子放入装有生理盐水的采样管中，24 h内送检。

1.3.2 样本质控 细胞悬液制片后进行显微镜湿片观察，每视野见大量细胞(并含柱状上皮细胞)的标本为合格；无上皮细胞，或细胞少且未见柱状上皮细胞的为不合格标本。

1.3.3 细胞片制备 在采样管中加入PBS 4．0 mL，进行振荡，洗脱细胞，1 900 r/min离心10 min，去除上清液，用PBS洗涤沉淀数次，最后加入0．5～1．0 mL的PBS，并用移液器将沉淀吹打成细胞悬液，吸取25 μL悬液分别点在玻片上7个孔内，玻片在室温自然干燥后，用冷丙酮固定10 min备用。

1.3.4 DFA病毒抗原检测 每个孔点加1滴含呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒3型(PIV3)、流感病毒A(FluA)、流感病毒B(FluB)、腺病毒(ADV)、副流感病毒1型(PIV-1)、副流感病毒2型(PIV-2)相应抗体的DFA染色试剂，37℃孵育30 min，用洗液洗涤4次后，加2～3滴封固液，封片后在荧光显微镜下观察结果，在对照板的孔内滴加相对应的DFA试剂。

1.3.5 结果判断 使用荧光显微镜(200×)观察结果，阴性细胞被染成红色；每视野观察到≥2个绿色荧光细胞为阳性。

1.3.6 质量控制 每次检测均须同步进行阴、阳对照试验，其中阳性对照应用试剂盒提供的阳性质控板(含7个病毒抗原)进行试验，只有在阴、阳对照试验正确时才可发出报告。

1.4 统计学分析 应用SPSS 21．0软件进行统计分析。采用χ2检验进行比较，以P≤0．05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 基本情况 2015年3月—2018年2月共纳入ARTI患者5 874例。以每年3月至次年2月为一个年度计，2015年1 176例，2016年1 741例，2017年2 957例；男性3 615例，女性2 259例；年龄1 d～94岁，其中6岁以下患儿5 078例。临床主要诊断：肺炎436例(男性268例，女性168例；年龄为2 d～94岁)、支气管肺炎1 881例(男性1 170例，女性711例；年龄为1 d～15岁)、毛细支气管炎478例(男性321例，女性157例；年龄为1 d～12岁)、上呼吸道感染720例(男性425例，女性295例；年龄为1 d～88岁)、发热1 761例(男性1 067例，女性694例；年龄为1 d～87岁)、其他598例(男性364例，女性234例；年龄为1 d～91岁)。

2.2 呼吸道病毒检出率 5 874例 ARTI患者中病毒检出阳性共1 150例，检出率为19．58%。各年份检出率分别为2015年11．48%(135例)，2016年21．71%(378例)，2017年21．54%(637例)。病毒检出阳性的1 150例 ARTI患者中男性737例，女性413例。其中单一病毒感染患者1 131例，占阳性患者的98．35%；混合感染患者19例，占阳性患者的1．65%。混合感染包括RSV+PIV3感染10例，RSV+ADV 3例，RSV+FluA 2例，FluA+PIV3 2例，RSV+PIV1 1例，PIV2+ADV 1例。检测的不同病毒中，RSV阳性率最高，为11．29%(663/1 150)，其余检出率由高至低依次为PIV3、FluA、FluB、ADV、PIV1、PIV2。见表1。

2.3 不同年龄ARTI患者呼吸道病毒检出情况 不同年龄段ARTI患者病毒阳性检出率比较，差异有统计学意义(P<0．05)。～6月组呼吸道病毒检出率最高(26．37%)，占阳性患者的39．83%(458/1 150)。除PIV1和混合感染组外，其余6种病毒阳性检出率比较，差异有统计学意义(均P<0．05)。不同年龄段ARTI患者中，6岁以下患儿检出率21．35%(1 084/5 077)，占阳性患者的94．26%。患者感染的病毒主要为RSV(57．65%)、PIV3(13．57%)、FluA(12．00%)。病毒混合感染患者的年龄主要为4岁以内。见表2。

2.4 不同季节ARTI患者呼吸道病毒检出情况 不同季节ARTI患者病毒阳性检出率比较，差异有统计学意义(P<0．05)。冬季呼吸道病毒阳性检出率最 高，为 25．01%，其 次 为 秋 季 (23．23%)。 除PIV1、PIV2和混合感染外，其他5种病毒抗原不同季节的阳性检出率比较，差异均有统计学意义(均P<0．05)。RSV在秋、冬季的阳性检出率分别达16．95%、14．37%；PIV3在春季的检出率最高，为4．07%；FluA在夏、冬季的阳性检出率较高，分别为3．20%、3．38%；FluB冬季的阳性检出率较高，为2．75%；PIV1、ADV四季散发，检出率均不高；PIV2的阳性检出率最低，仅12例。见表3。

表12015年3月—2018年2月ARTI患者呼吸道病毒检出情况

Table1Detection of respiratory tract virus in ARTI patients from March 2015 to February 2018

病毒阳性例数阳性检出率(%)构成比(%)单一感染1 13119.2598.35 RSV66311.2957.65 PIV31562.6613.57 FluA1382.3512.00 FluB751.286.52 ADV480.824.18 PIV1390.663.39 PIV2120.201.04混合感染190.321.65 RSV+PIV3100.17 0.87 RSV+ADV30.05 0.26 RSV+FluA20.03 0.17 FluA+PIV320.03 0.17 RSV+PIV110.02 0.09 PIV2+ADV10.02 0.09合计1 15019.58 100.00

表2 2015年3月—2018年2月不同年龄ARTI患者病毒检出情况[例(%)]

表3 不同季节 ARTI患者呼吸道病毒检出情况[例(%)]

注：本文中春季界定为3—5月，夏季为6—8月，秋季为9—11月，冬季为12—次年2月

2.5 不同临床诊断ARTI患者呼吸道病毒检出情况 不同临床诊断 ARTI患者病毒阳性检出率比较，差异有统计学意义(P<0．05)。支气管肺炎患者病毒阳性检出率最高，为28．60%。不同临床诊断 ARTI患者除PIV1、PIV2外，其他5种病毒抗原及混合感染的阳性检出率比较，差异具有统计学意义(均P<0．05)。支气管炎患者病毒阳性检出率为26．99%，其中喘息性支气管炎占12．40%(16/129)；肺炎患者阳性检出率为21．33%，上呼吸道感染患者阳性检出率为20．83%。RSV在支气管肺炎、肺炎以及支气管炎患者中的检出率较高，分别为20．63%、19．04%、17．36%；而FluA、FluB、ADV多从发热和上呼吸道感染患者中检出。见表4。

表4 不同临床诊断ARTI患者呼吸道病毒检出情况[例(%)]

3 讨论

近三年福建医科大学附属南平第一医院ARTI患者的7种呼吸道病毒抗原总检出率为19．58%，阳性病例数逐年增高。以单一感染为主，达1 131例，混合感染19例。主要感染病毒种类为RSV，与北京[6]、重庆[7]、苏州[8]等地的报道一致，表明RSV在不同地域和气候条件下都是儿童呼吸道感染的主要病原体，研究[9]表明，大多婴幼儿在2岁内有RSV感染经历。该院就诊的ARTI患者FluA、FluB的阳性检出率分别为2．35%、1．28%，较沈阳[10]、上海[11]低，略高于苏州[8]地区。可能与气候、地域、人口密度、样本纳入标准以及实验室检测方法的不同有关。FluB的感染率在近三年有较大的攀升，超过了ADV的感染率，而且FluB的感染人群年龄分布显示：6～15岁患者占32．00%，远超平均水平，值得关注。三类副流感病毒中，PIV3的检出率最高，PIV2的检出率最低。

本研究显示，6岁以下人群尤其6个月以下组的幼儿对呼吸道病毒最易感，而随着年龄的增长感染率出现下降趋势，这与婴幼儿、幼龄儿童的免疫系统尚未成熟，易发生感染性疾病有关。因此，婴幼儿、儿童是病毒感染的重点防治人群。6月以下组幼儿的病毒检出率最高，达26．37%，其中RSV占76．42%。PIV3的受累人群主要是3岁以下婴幼儿。6～15岁人群的总检出率较低，主要集中于流感暴发时间段感染FluA和FluB。以上数据表明，不同病毒在不同年龄段儿童中的感染率有差异，提示在防治儿童(尤其是婴幼儿)呼吸道病毒感染方面应给予重视。

南平地区地处山区，属典型的中亚热带海洋性湿润季风气候。秋、冬季气温低，昼夜温差大，降雨多，是本地区病毒易感季节。秋、冬季RSV的检出率分别达16．95%、14．37%，而在春季检出率并不高，仅为5．65%，显示RSV在本地区流行主要在秋、冬季，与河北地区[12]报道的一致。夏、冬季是FluA主要的流行时间。FluB检出主要集中在冬季。ADV、PIV1、PIV2四季散发，ADV冬季检出率略高。

患者感染呼吸道病毒后，主要表现为下呼吸道感染，占66．09%，包括支气管肺炎(46．78%)、支气管炎(11．22%)、肺炎(8．09%)。下呼吸道感染患者中，RSV的检出率最高，与研究[12-13]报道的一致，表明RSV可能是引发婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体。此外，在病毒阳性的支气管肺炎患者中喘息性支气管肺炎占24．54%，支气管炎患者中喘息性支气管炎占12．40%，显示呼吸道病毒感染可能诱发患儿出现喘息症状，与聂丹丹、罗玉岚等[14-15]报道的结果一致。

混合感染患者共19例，占1．65%，与邹丽容等[16]应用PCR法检测病毒核酸的结果较一致；低于朱华强等[17]应用间接免疫荧光法检测的结果。这与检测方法的原理有关，PCR法敏感性较DFA高[18]，可检测样本中微量的核酸片段(活病毒与死病毒的核酸片段均可检测出)，同时PCR反应受多个因素影响，其中最关键的是引物探针的特异性[19]。DFA法检测呼吸道脱落上皮细胞内的病毒抗原，标本来源与质量、取材时机均可影响检测结果[20]，在结果判断上存在一定主观性。间接免疫荧光法检测抗体可能受患者既往感染，体内产生的抗体代谢时间长而未消失的影响[21]，同时间接免疫荧光两步反应增加了检测的非特异性，与出现阳性率偏高有关。19例混合感染病例中，16例(84．21%)为RSV与其他病毒混合感染。因此，RSV同样是混合感染的主要病原体。研究[22-23]表明，儿童下呼吸道混合感染多由病毒引起，病毒感染引发呼吸道黏膜损伤以及细胞黏附因子增加，从而更易感染其他呼吸道病毒，而且儿童严重的呼吸道RSV感染很有可能增加患细菌性肺炎的风险。本研究中，混合感染病例数较少，混合感染对疾病严重程度的影响尚待做进一步探讨。

综上所述，该院近3年7种呼吸道病毒感染的ARTI病例数呈逐年增高的趋势，RSV的阳性检出率在7种常见呼吸道病毒中最高，秋、冬为本地区病毒易感季节，1岁以下儿童是呼吸道病毒的易感人群，患者感染呼吸道病毒后主要临床表现为支气管肺炎，呼吸道病毒感染可诱发喘息症状。