张艳华 王德普 孙家栋 王 洋 宋 祺 张朝立 高长久

（牡丹江医学院药学院，黑龙江 牡丹江 157011）

鸡树条果（Fruit of Sargent Viburnum），又名荚蒾果，始载于《吉林中草药》，为忍冬科荚蒾属植物鸡树条荚蒾Viburnum opulus Linn.var.calvescens（Rehd.）Hara的果实［1］，民间常用于急（慢）性气管炎、咳嗽等病症。现代研究发现，其主要有黄酮类、酚类、微量元素、挥发油、多糖、氨基酸、有机酸、香豆素类及其苷类等化学成分［2］。本课题采用水和乙醇两种溶剂分别对鸡树条果进行提取，并对其水提物和醇提物的抗炎、祛痰和镇咳活性进行考察，为进一步分析其抗炎、祛痰和镇咳有效部位奠定基础，为拓展其临床范围和合理用药提供理论依据。

1 材料与仪器

1.1 实验动物 健康昆明种小鼠，清洁级，体质量为（20±2）g，雌雄兼用。由哈尔滨医科大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK（黑）2013-001。实验前在本实验室适应性饲养3 d，室温 19～24℃，相对湿度45%～68%。本实验在严格按照动物保护规定下进行。

1.2 实验药品与试剂 鸡树条果药材，采自黑龙江牡丹峰国家级自然保护区，经黑龙江中医药大学药学院中药资源与开发教研室王振月教授鉴定为忍冬科荚蒾属植物鸡树条荚蒾，将采摘的新鲜鸡树条果在背光通风条件下阴干，即得干品；吲哚美辛，批号：170725，广东华南药业集团有限公司提供；麻杏止咳片，批号：20170613，吉林双药药业集团有限公司提供。伊文思蓝，批号：170621，上海如吉生物科技发展有限公司提供；二甲苯，批号：170819，哈尔滨市化工试剂厂提供；冰醋酸，批号：20170822，天津市永大化学试剂有限公司提供；75%乙醇，批号：20170817，成都市科龙化工试剂厂提供；苯酚红，批号：20170716，军事医学科学院提供；碳酸氢钠，批号：20170813，天津博迪化工股份有限公司提供；氯化钠注射液，批号：S17082612-2，吉林康乃尔药业有限公司提供；氨水，批号：20170913，沈阳市新东试剂厂提供。

1.3 实验仪器 电子天平，型号T1000，常熟市双杰测试仪器厂提供；分析天平，型号 AX200，SHIMADZU CORPORATION JAPAN提供；紫外-可见分光光度计，型号752N，上海精密科学仪器有限公司提供；离心机，型号TDL-80-2B，上海安亭科学仪器厂提供。多功能诱咳引喘仪，型号YLS-8A，济南益延科技发展有限公司提供；高速粉碎机，型号WK-600A，贵州市精诚医药装备制造有限公司提供；可调控温电热套，型号ZDHW，北京中兴伟业仪器有限公司提供。

2 实验方法

2.1 鸡树条果2种提取物的制备

2.1.1 水提物的制备 鸡树条果药材用粉碎机粉碎成粉末状，将粉末加10倍量蒸馏水浸泡1 h，回流提取3次，1 h/次，抽滤，合并滤液，离心取上清液，浓缩所得浸膏，即鸡树条果水提物，将浸膏加蒸馏水溶解，调节pH值为7.2，放入冰箱中3～4℃冷藏备用。

2.1.2 醇提物的制备 将药材鸡树条果粉碎过筛，粉末加75%乙醇70℃下回流提取 3次，1 h/次，抽滤，合并滤液，离心取上清液，浓缩所得浸膏，即鸡树条果醇提物，将醇提物用无水乙醇溶解，蒸馏水稀释，调节pH值为7.2，放入冰箱中3～4℃冷藏备用。

2.2 剂量设定 通过预实验，确定鸡树条果两种提取物抗炎、祛痰和镇咳实验的最低有效剂量均为 3.2 g/kg（生药/体重），设定中、高剂量组给药剂量分别为6.4，12.8 g/kg（生药/体重）。

2.3 小鼠耳肿胀实验 取80只小鼠随机分为8组，即鸡树条果水提物高、中、低剂量组，鸡树条果醇提物高、中、低剂量组，生理盐水组，吲哚美辛组，每组10只。鸡树条果水和醇提物高、中、低剂量组的灌胃给药剂量分别为 12.8，6.4，3.2 g/kg（生药/体重），吲哚美辛组给药剂量为0.0094 g/kg，空白对照组灌胃给予等体积的生理盐水。每天按0.2 mL/10 g灌胃给药1次，连续7 d。于末次给药1 h后，将0.05 mL二甲苯均匀的涂抹于各组小鼠右耳的两面，小鼠的左耳不涂作为对照，致炎0.5 h后，脱颈椎处死，沿着小鼠耳廓剪下小鼠的两耳，用直径为6 mm的打孔器，在两耳相同位置打下耳片，分别称重，记录小鼠左右耳片重量，按下述公式计算肿胀度与肿胀抑制率［3-6］。

肿胀度=肿胀耳（右耳）重量-对照耳（左耳）重量肿胀抑制率（%）=（对照组平均肿胀率-给药组平均肿胀率）/对照组平均肿胀率×100%。

2.4 小鼠腹腔渗透实验 实验分组、给药方法如同“2.3”，末次给药1 h后，经小鼠尾静脉注射 0.5%伊文思蓝生理盐水溶液10 mL/kg，10 min后腹腔注射0.6%冰醋酸10 mL/kg，15 min后脱颈椎处死小鼠，腹腔注射生理盐水6 mL，轻揉腹部3 min，从腹腔中取腹腔冲洗液3 mL（如有血液污染，弃去不用），2000 r/min离心10 min（r=8 cm），取上清液用紫外-可见分光光度计于波长590 nm处测定吸光度 （A） 值［3-6］。

2.5 小鼠祛痰实验 除阳性对照组更换为麻杏止咳片组（0.8 g/kg）外，实验分组、给药方法均同“2.3”，末次给药0.5 h后，腹腔注射0.5%酚红 20 mL/kg，0.5 h后脱颈椎处死小鼠，仰卧位固定于蛙板上并分离气管，剥离气管周围组织，剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管，放入盛有2 mL生理盐水的试管中，再加0.1 mL 5%NaHCO3溶液，1000 r/min离心0.5 h，取上清液，用可见分光光度计于波长546 nm处测吸光度（A）值［7-9］。2.6小鼠镇咳实验 实验分组、给药方法同“2.5”。连续给药7 d，于末次给药0.5 h后将小鼠置于诱咳引喘仪中，设定氨水诱咳时间为30 s，测定时间为5 min，观察并记录此过程中小鼠咳嗽潜伏期（从诱咳至发生首次咳嗽的时间）和小鼠在5 min内咳嗽的次数（小鼠腹肌收缩或缩胸，并张大嘴，头向前倾，有时带有咳嗽声）［7-9］。

2.7 统计学方法 各组实验数据结果以（x±s）表示，采用SPSS 17.0数据处理软件进行方差检验，组间比较用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 对小鼠一般特征的影响 各实验组小鼠生活状态与实验前均无明显差别，无精神萎靡或死亡，饮食量与饮水量基本稳定，各组体重增长速度无明显差异。

3.2 鸡树条果对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 与生理盐水组比较，鸡树条果水提物中剂量组（P＜0.05）、高剂量组（P＜0.01）、鸡树条果醇提物高剂量组 （P＜0.05） 及吲哚美辛组（P＜0.01）均有统计学意义，对二甲苯所致的耳肿胀均有明显的抑制作用，表明鸡树条果水、醇提取物均有抗炎作用，且水提物抗炎作用优于醇提物。见表1。

表1 鸡树条果对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 （±s，n=10）

表1 鸡树条果对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 （±s，n=10）

注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 剂量（g/kg）生理盐水组吲哚美辛组鸡树条果水提物低剂量组鸡树条果水提物中剂量组鸡树条果水提物高剂量组鸡树条果醇提物低剂量组鸡树条果醇提物中剂量组鸡树条果醇提物高剂量组肿胀度（mg） 肿胀抑制率（%）--71.10 10.82 36.19 65.26 6.90 13.09 45.00 0.009 4 3.2 6.4 12.8 3.2 6.4 12.8 22.91±2.67 6.62±1.46**20.43±3.01 14.62±1.84*7.96±2.33**21.33±1.12 19.91±2.13 12.60±1.84*

3.3 鸡树条果对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 与生理盐水组比较，鸡树条果水提物中剂量组（P＜0.01）、高剂量组（P＜0.01）、鸡树条果醇提物中剂量组（P＜0.05）、高剂量组 （P＜0.01） 及吲哚美辛组 （P＜0.01）均有统计学意义，对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性均有明显的抑制作用，表明鸡树条果水、醇提取物均有抗炎作用，且水提物抗炎作用优于醇提物。见表2。

表2 鸡树条果对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（±s，n=10）

表2 鸡树条果对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（±s，n=10）

注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 剂量（g/kg）生理盐水组吲哚美辛组鸡树条果水提物低剂量组鸡树条果水提物中剂量组鸡树条果水提物高剂量组鸡树条果醇提物低剂量组鸡树条果醇提物中剂量组鸡树条果醇提物高剂量组-0.009 4 3.2 6.4 12.8 3.2 6.4 12.8光吸收值(A)0.30±0.06 0.07±0.03**0.21±0.08 0.09±0.04**0.08±0.04**0.23±0.08 0.16±0.04*0.09±0.04**

3.4 鸡树条果对小鼠气管酚红排泌量的影响 与生理盐水组比较，鸡树条果水提物中剂量组（P＜0.05）、高剂量组（P＜0.01）、鸡树条果醇提物中剂量组（P＜0.05）、高剂量组 （P＜0.01） 及麻杏止咳片组 （P＜0.01） 均有统计学意义，对均能明显增加小鼠气管酚红的排泌量，表明鸡树条果水、醇提取物均有祛痰作用，且两种提取物祛痰作用相当，无明显差异。见表3。

表3 鸡树条果对小鼠气管酚红排泌量的影响 （±s，n=10）

表3 鸡树条果对小鼠气管酚红排泌量的影响 （±s，n=10）

注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

光吸收值(A)0.06±0.03 0.16±0.06**0.08±0.05 0.11±0.05*0.15±0.06**0.08±0.06 0.10±0.06*0.14±0.05**组别 剂量（g/kg）生理盐水组麻杏止咳片组鸡树条果水提物低剂量组鸡树条果水提物中剂量组鸡树条果水提物高剂量组鸡树条果醇提物低剂量组鸡树条果醇提物中剂量组鸡树条果醇提物高剂量组－0.8 3.2 6.4 12.8 3.2 6.4 12.8

3.5 鸡树条果对浓氨水致小鼠咳嗽的影响 与生理盐水组比较，鸡树条果水提物低剂量组（P＜0.05）、中剂量组 （P＜0.01 或 P＜0.05）、高剂量组 （P＜0.01）、鸡树条果醇提物低、中剂量组 （P＜0.05）、高剂量组 （P＜0.01） 及麻杏止咳片组（P＜0.01）均有统计学意义，对浓氨水致小鼠咳嗽的潜伏期及 5 min内咳嗽次数均有明显的抑制作用，表明鸡树条果水、醇提取物均有镇咳作用，且两种提取物镇咳作用相当，无明显差异。见表4。

表4 鸡树条果对浓氨水致小鼠咳嗽的影响 （±s，n=10）

表4 鸡树条果对浓氨水致小鼠咳嗽的影响 （±s，n=10）

注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 剂量（g/kg）生理盐水组麻杏止咳片组鸡树条果水提物低剂量组鸡树条果水提物中剂量组鸡树条果水提物高剂量组鸡树条果醇提物低剂量组鸡树条果醇提物中剂量组鸡树条果醇提物高剂量组潜伏期(s) 咳嗽次数(n)-0.8 3.2 6.4 12.8 3.2 6.4 12.8 21.5±1.23 47.1±1.40**32.7±1.22*35.6±1.23*42.9±1.42**33.5±1.19*36.7±1.20*43.6±1.38**65.1±1.46 17.6±0.87**57.9±1.21 36.4±1.28**29.1±1.23**58.5±1.24 45.0±1.31*29.7±1.16**

4 讨论

鸡树条果药材原植物鸡树条荚蒾主产于东北、华北及陕西、甘肃等地，山东、安徽、浙江、江西、河南、湖北、四川等地亦有分布。其中黑龙江地区鸡树条荚蒾野生分布广、栽培区域大，储量巨大，为鸡树条果在中药领域的研发与应用提供了深厚的资源基础［10］。其枝、叶（鸡树条）药理作用显著，尤其是在解痉、止血、抗胆碱酯酶、血管保护等方面，其果实同样具有极强的药用开发价值。

小鼠耳肿胀实验提示鸡树条果水和醇两种提取物高、中剂量组均可抑制由二甲苯致炎剂引起的某些炎症介质（如组胺、激肽、纤维蛋白溶解酶等）的释放，降低局部毛细血管扩张和通透性增加及炎症细胞浸润，从而减轻耳部急性渗出性炎性水肿；小鼠腹腔渗透实验提示鸡树条果两种提取物高、中剂量均可降低因腹腔注射冰醋酸溶液中H+作用下引起的腹腔毛细血管通透性增高，减少血液液体成分（如伊文思蓝与血浆蛋白结合物等）从血管内向腹腔渗出，从而对急性炎症产生抑制作用；小鼠镇咳实验提示鸡树条果两种提取物高、中剂量均能抑制呼吸中枢或降低呼吸道感受器敏感性，减轻由化学物质浓氨水刺激呼吸道感受器所引起的反射性咳嗽，从而达到镇咳效果；小鼠祛痰实验提示鸡树条果两种提取物高、中剂量均能使呼吸道粘膜粘液腺排出的酚红量增加，说明支气管粘膜分泌液增加，从而达到祛痰效果。

本项目从药效学角度研究表明，鸡树条果水和醇两种提物高、中剂量组在抗炎、祛痰、镇咳作用方面均有统计学意义（P<0.01或P<0.05），且存在着一定的量效关系。水提物抗炎作用较好，推测其与发挥抗炎作用的有效成分水溶性较好有关。同时，本课题组对鸡树条果中发挥抗炎、祛痰、镇咳作用的有效成分及其具体作用机制正在进一步研究中。