氨基酸纸色谱层析法实验条件优化的探索
2019-03-21刘颖沙刘小宁李国秀
杨凌职业技术学院学报 2019年1期
刘颖沙, 刘小宁, 李国秀, 刘 伟, 时 静, 孙 进, 钟 阳
(杨凌职业技术学院, 陕西 杨凌 712100)
纸色谱法是以滤纸为支持物的层析技术,滤纸纤维上分布大量的亲水性羟基,因此与水亲和力强,与有机溶剂亲和力弱,所以在展层时,水是固定相,有机溶剂是流动相,由于溶质在两相中分配系数不同,不同的氨基酸随流动相移动的速率就不同,于是将这些氨基酸分离开来,形成距原点距离不同的色谱点,各物质分配系数相差越大,则越容易分开。样品被分离后在纸色谱图谱上的位置,常用比移值Rf(Rf=原点到色谱点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离)表示,在一定条件下(如温度、展开剂的组成、色谱纸质量等不变),某物质的Rf是定值,可作为定性分析的依据。纸色谱分离技术广泛应用于氨基酸、蛋白质、染料、色素和中草药等物质的分离和鉴定,其操作简便,样品用量小,既可以用作实验室的定性分离,也可用于工业生产产品的分析制备,现已成为生物化学和生物工程等学科必不可少的分析工具之一。在农产品质量检测专业的《食品生物化学》课程中“氨基酸的纸色谱”是学生重要的实验实训内容[1],但是如果按照课本步骤操作:首先,耗时过长,无法在4学时内完成实验;其次,用微量注射器或者毛细管进行点样的方式受人为因素干扰,组间结果差异较大;第三,滤纸易受污染,用滤纸作为惰性支持物容易影响最后分离效果;第四,展开剂展开速度较慢且有刺激性气味;……
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