何洪武，穆尔扎提·尤努斯，贾海军，赛普丁·马合木提，苏 刚，刘震江， 周 程，牛志宏*

（1.新疆乌恰县畜牧兽医局，新疆 乌恰县 845450；2.新疆豪子畜牧业有限公司，新疆 奇台县 831800）

胚胎移植技术是一项非常成熟的繁育技术，在畜牧业生产和科研中得到广泛的应用[1，2]，已经商品化的性控精液，能提高母犊的比例，可以达到90%以上的母犊率[3]，我们将性控冻精和超数排卵技术结合起来，生产体外性控胚胎进行胚胎移植，可快速的进行纯繁，扩大乳肉兼用型西门塔尔牛的种群，培育优良的西门塔尔种母牛和种公牛，创造更高的经济效益[4，5]。

1 材料方法

1.1 试验对象

2019 年3-6 月，选择新疆奇台县新疆豪子畜牧业有限公司良繁场饲养的健康、无繁殖障碍的大育成

西门塔尔母牛162 头为供体牛，年龄在14～16 月之间，体重达到350 kg 以上。 试验分为2 组，性控冷冻精液组102 头，为实验组；常规冷冻精液组为60 头，为对照组。

1.2 试验药品

促卵泡素（FSH）400 mg/20 mL 加拿大（Animal Health Canada Information Center） 生产，氯前列烯醇（PG）由宁波第二激素厂生产，阴道栓（CIDR）由新西兰DEC 公司生产， 冲卵液，胚胎保存液，胚胎冷冻液为美国生产。

1.3 精液的选择

西门塔尔牛性控冻精由新疆天山畜牧生物工程有限公司生产， 常规冷冻精液为德国诺丁林公司生产。 冷冻精液解冻后每支细管为0.25 mL，约含200 万个精子，精子活力0.4 以上。

1.4 超数排卵方案

选择除发情当日的任意一天埋入阴道栓， 从埋栓第5 d 开始（埋栓当日为0 d， 连续4 d 肌肉注射FSH，采用递减法，早晚等剂量注射，最好早晚对时注射，第3 d 早晚各肌注前列腺素（PG）0.4 mg，超排注射结束的当天早上撤出阴道栓，并用含青霉素的生理盐水清洗阴道。

1.5 人工授精

撤栓后开始观察发情表现，大部分在第2 d 早上就开始发情，看到母牛接受爬跨后14～16 h 输精，10 h 后重复输精一次，每次输精使用一支冻精。 冻精从液氮罐取出直接放入37.5 ℃的温水中进行解冻，10 s 后进行输精工作，精液必须输至子宫角小弯处。

1.6 冲卵和胚胎采集

冲胚采用非手术法，在发情后第7 d（发情日为0 d），进行冲胚，将回收的冲胚液带回实验室检出胚胎，根据胚胎的形态，细胞的数量和大小以及胚胎的发育情况，将胚胎分为可用胚胎和退化，未受精等级别，可用胚胎用于冷冻及鲜胚移植，退化胚胎及未受精卵母细胞则弃用。

1.7 冲胚后子宫处理

冲胚结束后， 用冲卵管向供体牛子宫内注射长效抗生素药物50～100 mL， 同时肌肉注射前列腺素（PG）0.4 mL。

2 结 果

2.1 同期发情结果比较

观察经过激素处理后西门塔尔牛的发情表现，并以接受爬跨为观察重点。 撤出阴道栓后只有试验组一头西门塔尔牛未发情，发情率达99.38%。 经数据分析，将该未发情牛剔除试验组，不影响后续结果分析。

2.2 两种冻精对西门塔尔牛超排结果比较

实验组超排供体西门塔尔牛102 头， 用性控冻精输精后回收胚胎数1 122 枚， 平均回收胚胎数11.00±3.11 枚/头，其中可用胚数575 枚，平均可用胚5.64±1.72 枚/头，退化胚胎186 枚，未受精361 枚。对照组超数排卵西门塔尔供体牛60 头，用常规冻精输精后回收胚胎数731 枚，头均回收胚胎数12.18±3.93 枚，其中可用胚数347 枚，头均可用胚5.78±1.88 枚，退化胚胎数为175 枚，未受精数为209 枚。 两组之间头均胚胎数、头均可用胚胎数和头均未受精胚卵母细胞数均无显著差异（P ＞0.05），头均退化胚胎数差异显著（P ＜0.05），见表1。

表1 两种不同冻精对西门塔尔牛超排结果比较

3 讨 论

同期发情是进行胚胎移植的前提和基础，高发情率和高发情同期化程度将影响供体牛的利用效率和有效胚胎数[6]。 本试验用CIDR 阴道栓和依次递减的促卵泡素FSH 剂量处理的西门塔尔牛同期发情率达到99.38%，高于已报道的试验结果。 由于供体牛经超数排卵后有大量的卵泡生成，排卵的数量也比较多[7，8，9]，所以适当的推后输精时间，在看到接受爬跨后14～16 h 输精是可行的，而且超排药物FSH 剂量应当在控制在合适的计量，过高则会使卵巢超排反应过度，过低则达不到超排效果，我们经过摸索，总结认为加拿大的促卵泡素FSH 剂量应当控制在500 mg/头较为合适。

由于性控冻精有效精子在生产过程中要经过精子染色，分选过程，对精子产生一定的伤害，其精子活力和受精能力可能会受到影响。 本研究的试验组和对照组供体牛的超排后进行人工授精，两组头均可用胚胎差异不显著，说明该性控冻精的受精能力与常规冻精无差别。 性控冻精和常规冻精生理状态的不同，性控精液分选过程会改变精子质膜状态的生理状态，缩短完成获能反应时间而具有受精能力，并与卵母细胞结合，虽然也会缩短精子的寿命，但通过改变受精时间，可显著提高性控冻精受精能力[10，11，12]。性控胚胎的经济价值要比常规胚胎胚胎高很多，应用性控冻精生产体内胚胎可以快速提高具有顶级遗传资源品质的种公牛后代母牛的数量，提高种群的数量，快速的提高种群的生产品质，加快品种改良进程，同时为企业带来新的利润增长点，更为性控胚胎生产的产业化奠定了基础[13，14]。