（宁夏职业技术学院（宁夏广播电视大学），宁夏银川750021）

任辉丽，何月红，罗爱华，李文甲，李晓玉

枸杞子为茄科植物枸杞（Lycium barbarum）的干燥成熟果实，药用价值极高，具有益精明目等功效，同时用于治疗眩晕耳鸣等病症。枸杞的营养价值也很高，近年来，枸杞多糖（Lycium barbarump ol y s a cch a r i de，LB P）作为枸杞中的主要活性成分被广泛研究，研究证实其具有抗氧化、抗肿瘤等多种药用功效，具有良好的发展前景。

枸杞多糖的提取方法多样，目前主要采用的方法是热水浸提法，该方法具有易于操作的优点，同时也具有提取效率低等诸多缺点，使用该方法提取时，由于高温会破坏多糖结构，因此提取后生物活性明显降低。另外报告较多的是酶法和超声辅助浸提法，其中酶法可以分解植物细胞壁及细胞膜的成分，超声辅助浸提法的原理则是利用超声波的空化效应，同时结合机械剪切作用共同破坏细胞壁结构，主要目标是提高有效成分收率。依据目前的报道，该试验中，充分利用超声增强复合酶的活性和超声强化传质，有效缩短浸提时间，既提高破壁效率，又在提取过程中充分促进多糖溶解，提高枸杞多糖的提取效率。

目前在枸杞主产区中宁县种植较为广泛的品种是宁杞7号（2010年培育），该品种因鲜果深红色，果粒大且均匀，口感好，主要活性成分含量高而被茨农广为接受。该课题在广泛吸取国内外学者研究成果的基础上，一方面对宁杞7号枸杞多糖提取工艺进行优化，另一方面对枸杞多糖积累规律开展系统性研究，为提高宁杞7号枸杞的利用效率、获得枸杞子最佳采收时期提供一定的理论依据，从而进一步充分合理地开发利用枸杞的药用价值。

1 材料与方法

1.1 试验材料

宁杞7号枸杞（宁夏中宁县早康贸易有限公司）。试剂：苯酚、浓硫酸（分析纯）、脂肪酶（200 000 U/g）、果胶酶（200 000 U/g）、蛋白酶（200 000 U/g）、纤维素酶（20 000 U/g）、无水乙醇、葡萄糖。仪器：分析天平、高速中药粉碎机、低速自动平衡微型离心机、电热恒温水浴锅、超声波药品处理机。

1.2 宁杞7号枸杞多糖提取工艺研究

1.2.1 枸杞预处理。将宁杞7号洗净，剪碎后干燥，粉碎，密封保存于4~8℃环境中。

1.2.2 枸杞多糖提取工艺。超声法提取工艺（超声提取功率为200 W，频率为45 kH z）：准确称取适量枸杞粉末→按一定的料液比加水→添加复合酶→超声波法提取→离心→超声提取液，每个样品做3次重复。

1.2.3 枸杞多糖含量的测定方法和多糖提取率的计算公式。测定超声提取液以及热水浸提提取液中的多糖含量，再按下式计算多糖提取率。

1.2.4 L9（34）正交试验设计。选取料液比（A）、超声时间（B）、提取温度（C）和复合酶添加量（D）4个因素，进行L9（34）正交试验，以枸杞多糖提取率为评价指标，最终确定枸杞多糖提取的最优工艺条件（表1）。

1.3 宁杞7号枸杞多糖积累规律研究

以宁杞7号为材料，4个重复，从开花坐果到果实成熟的整个发育过程中，共取样8次，果实发育前期，采样时间间隔较长，到成熟期适当缩短取样时间。每重复具体采样时间为花后8、14、21、25、27、29、31、34 d。

于8:30—9:30采样，分别从标记植株树冠的东、南、西、北4个方向以及上、中、下、内、外各个方向采取无病虫害的果实，测定枸杞多糖含量。

2 结果与分析

2.1 宁杞7号枸杞多糖提取工艺研究

2.1.1 超声波提取单因素试验结果

2.1.1.1 料液比对枸杞多糖提取率的影响。预设多梯度料液比：1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50，在试验中设定温度为60℃，超声波时间为40 m in，提取次数为1次。从图1可以看出，枸杞多糖提取率随着料液比的增大呈现先增加后减小的趋势，料液比为1∶30时枸杞多糖提取率达到最高，为7.102%。可能是因为料液比低于1∶30，超声波处理时，由于溶液浓度较大，不易形成空化现象；当料液比高于1∶30时，溶液中底物与酶的质量浓度下降，有效反应碰撞减少，导致提取率随之降低。

2.1.1.2 超声提取时间对枸杞多糖提取率的影响。预设多梯度超声时长：20、30、40、50、60 m in，试验中设定温度为60℃，料液比为1∶30，提取次数为1次。从图2可以看出，提取时间小于40 m in时，枸杞多糖的提取率随着提取时间的延长而增加，提取时间为40 m in时，枸杞多糖提取率达到最高，为7.735%，当提取时间大于40 m in时，枸杞多糖提取率呈下降趋势。可能是由于超声时间过长影响了多糖的结构所致。

2.1.1.3 超声温度对枸杞多糖提取率的影响。预设多梯度超声温度：45、50、55、60、65℃，设定料液比为1∶30，提取时间为40 m in，提取次数为1次。从图3可以看出，提取温度低于55℃时，枸杞多糖的提取率随着温度的升高而增加，提取温度为55℃时，枸杞多糖提取率达到最高，为7.236%，当提取温度高于55℃时，枸杞多糖提取率呈下降趋势。温度影响酶的活性，在适宜温度范围内，适当升温可以通过提高酶的活性增大枸杞多糖提取率，但当温度过高时，酶活性下降，枸杞多糖提取率降低。

2.1.1.4 复合酶添加量对枸杞多糖提取效果的影响。从图4可以看出，当酶添加量低于0.6%时，枸杞多糖提取率随着酶添加量的增大而增加，在酶添加量为0.6%时枸杞多糖提取率达到最大，为7.017%，当酶添加量高于0.6%时，随着酶添加量的增大枸杞多糖提取率缓慢下降。这是因为在其他条件相同的情况下，酶浓度在一定范围内，酶促反应速率与酶浓度呈正比，当酶浓度超过了一定范围时，酶用量达到了饱和。

表1 L 9（34）正交试验各因素水平

图1 料液比对宁杞7号枸杞多糖提取率的影响

图2 提取时间对宁杞7号枸杞多糖提取率的影响

2.2.2 正交设计提取枸杞多糖。在单因素试验的基础上，以多糖提取率为评价指标，对料液比、浸提时间、提取温度、复合酶添加量进行L9（34）正交试验（表2）。观察表2中极差值R，R值愈大，说明该因素对试验结果的影响愈大。表2中各因素对枸杞多糖提取率的影响显著程度依次为：B＞A＞D＞C，即提取温度＞料液比＞复合酶添加量＞超声时间。最佳提取工艺条件为料液比1∶40 g/mL，提取温度50℃，超声时间50 m in，复合酶添加量0.7%，枸杞多糖提取率达到8.044%，认为该组合（A2B1C2D3）为超声波辅助复合酶法提取枸杞多糖的最佳提取工艺条件。

2.2 宁杞7号枸杞多糖积累规律研究

利用宁杞7号枸杞多糖的最佳提取工艺条件分别在花后8、14、21、25、27、29、31、34 d采样测定枸杞多糖。从图5可以看出，枸杞多糖的积累在花后21 d前很缓慢，而花后21~27 d，枸杞多糖的含量迅速增加，花后27 d之后枸杞多糖含量逐渐下降。果实成熟时（花后27 d），枸杞多糖含量达到最大值8.567%。

图3 温度对宁杞7号枸杞多糖提取率的影响

图4 复合酶添加量对宁杞7号枸杞多糖提取率的影响

图5 果实发育过程中枸杞多糖含量的变化

表2 枸杞多糖提取条件优化正交试验结果与分析

3 结论

单因素试验和L9（34）正交试验提取宁杞7号枸杞多糖结果表明，超声辅助复合酶法提取宁杞7号枸杞多糖最佳提取工艺条件为料液比1∶40 g/mL，浸提温度50℃，超声时间50 m in，复合酶添加量0.7%，在此条件下枸杞多糖提取率为8.044%，该方法用时较短，效率高，为提高宁杞7号枸杞多糖的提取效率提供了理论依据。

宁杞7号果实枸杞多糖积累规律试验表明，枸杞多糖的积累在花后27 d达到最大值。该研究为提高宁杞7号枸杞的利用效率、获得枸杞子最佳采收时期提供了理论依据，从而进一步充分合理地开发利用枸杞的药用价值。