李 娟 王永超 杨江成 李 玲

糖尿病肾病作为糖尿病最为常见的并发症之一，不但是糖尿病致死、致残的主要原因，也是终末期肾病的第2大病因[1]。然而目前对于本病缺乏有效的治疗手段，除了控制血压、血糖、血脂以及ACEI/ARB等的药物以外，中医药成为临床医生治疗本病的不二选择。然而中医药治疗本病的效果虽然显著，但机制难寻，本研究正是基于以上认识，通过观察益肾别浊汤对糖尿病肾病大鼠SOD及iNOS的影响，试图从氧化应激方面阐述益肾别浊汤防治糖尿病肾病的可能机制，为中医药的现代化提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1实验动物选取清洁级雄性SD大鼠共90只(由山东中医药大学动物实验室提供，许可证号：2016-0023)，体质量在(230±10)g之间，温度控制在(20±2)℃，湿度控制在(65±3)%，敏感周期为12 h，高脂喂养。

1.2药物制备益肾别浊汤：党参、黄芪、车前子各10 g，茯苓、山药、枸杞子、石韦各15 g，五味子、芡实各5 g，由本院中药炮制中心制成药量1 kg/L的药物浓缩液。

1.3主要试剂超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)试剂盒由北京大康生物有限公司提供，血糖试纸由雅培公司提供，肾功能试剂盒由南京建成生物有限公司提供，采用日立8000全自动生化仪进行检测。

1.4糖尿病肾病模型大鼠的制备所有大鼠适应性喂养1周后，随机分为健康对照组(30只)和模型对照组(60只)，模型对照组禁食8 h后，按照30 mg/kg进行而静脉注射STZ，高脂喂养1周后，尾静脉测空腹血糖，若血糖水平大于11.1 mmol/L则视为造模成功。60只大鼠共成功造模42只(造模成功率为70%)，将模型组大鼠随机分为模型对照组(21只)和治疗组(21只)，治疗组给予益肾别浊汤生药5 g/kg·d，健康对照组和模型对照组给予等量的生理盐水灌胃。

1.5标本取材所有大鼠喂养8周后，采用心脏取血的方法抽取3 ml血液，分别进行血糖、血肌酐、尿素氮、SOD以及iNOS的测定，取双侧肾脏称重以计算肾系数。肾系数=双侧肾脏重量(g)/体质量(kg)×100%。

2 结果

2.1大鼠一般情况及肾系数的比较模型组大鼠自造模第3日起，出现多饮多食等糖尿病等症状，随着时间的延长逐渐出现体质量下降，精神不振，毛发枯萎等肾病症状。模型对照组及治疗组大鼠体质量较健康对照组明显下降(P<0.05)，而肾系数则明显升高(P<0.05)；治疗组肾系数明显低于模型对照组(P<0.05)，但体质量无明显差异(P>0.05)。结果详见表1。

表1 各组大鼠体质量及肾系数比较 (只，

注：与对照组比较，1)P<0.01；与模型对照组比较，2)P<0.05

2.2大鼠血糖及肾功能的比较经统计学分析发现，模型组大鼠血清葡萄糖、尿素氮及肌酐水平显著高于健康对照组，提示造模成功。进一步分析发现治疗组的血糖水平及肾功能显著低于模型对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。结果详见表2。

表2 各组大鼠血糖及肾功能比较 (只，

注：与对照组比较,1)P<0.01;与模型对照组比较,2)P<0.05;与模型对照组比较,3)P<0.01

2.3大鼠SOD及iNOS的变化经统计学分析发现，模型对照组、治疗组大鼠SOD水平较健康对照组明显下降，其中模型对照组下降最为明显，各组间均有统计学意义(P<0.05)；模型对照组、治疗组大鼠iNOS水平较健康对照组明显升高，其中模型对照组升高最为明显，各组间均有统计学意义(P<0.05)；结果详见表3。

表3 各组大鼠SOD及iNOS水平比较 (只，

注：与对照组比较,1)P<0.01;与模型对照组比较,2)P<0.05;与模型对照组比较,3)P<0.01

3 讨论

目前中医尚无“糖尿病肾病”的病名，不过早在《素问病机气宜保命集》中就有此病的描述“肾消者，病在下焦，初发为膏淋，下如膏油之状，至成而面色黧黑，形瘦而耳焦， 小便浊而有脂”，此文献详细的描述了本病由早期的蛋白尿期至终末期肾病的临床表现，并首次提出了“肾消”的概念。《圣济总录》中有“消渴病久肾气受伤，肾主水，肾气虚衰，小便至甜，有膏”，此文也明确了本病病位在肾，肾气虚弱为主要病机，因此益肾气、别清浊是治疗本病的主要治疗原则。益肾别浊汤以益肾气为大法，同时佐以健脾养肾，别清浊的方药进行辨证论治，方中党参、黄芪补气，山药、枸杞子滋补肝肾共为君药，茯苓健脾，芡实、五味子收敛固精，佐以车前子、石韦以利尿渗湿，别清泌浊，全方组方严谨，君臣搭配共奏益肾别浊之功。在本研究中，治疗组大鼠的体质量、肾系数以及肾功能水平明显优于模型对照组，提示益肾别浊汤确实具有保护模型大鼠肾脏的作用。

现代医学认为，糖尿病患者体内不仅仅存在糖脂代谢紊乱，同时也存在大量的炎症因子、细胞生长因子以及氧化应激反应等[2，4]，在这些因素的共同作用下，肾脏血流动力学发生了改变，从而导致尿蛋白和肾功能的变化，其中氧化应激反应逐渐受到重视，多数学者认为其在本病的发生中扮演了重要角色[5]。近年来许多研究发现[6，7]，高血糖不但可以升高肾脏组织内的抗氧化酶的表达，也可以升高大鼠肾脏组织中的氧化应激水平，在糖尿病肾病的发生中可能起到重要作用。SOD是体内的一种抗氧化酶，它可以通过清除体内过多的超氧阴离子自由基，并以此来减少脂质过氧化反应，使机体免受损伤[8]。NOS在机体内主要以机构型(cNOS)和诱导型(iNOS)两种形式存在，其中后者主要分布在肾脏、心脏以及血管内皮中，具有合成NO的作用，是一种重要的促炎性酶，在正常情况下呈低表达或者不表达状态，但受到内毒素、促炎症因子以及其它蛋白酶的刺激时，可以被迅速激活，导致炎症反应的发生[9，10]。本研究发现，模型对照组、治疗组大鼠SOD水平较健康对照组明显下降，但治疗组SOD下降幅度明显低于模型对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)；模型对照组、治疗组大鼠iNOS水平较健康对照组明显升高，但治疗组iNOS水平升高幅度明显低于模型对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。上述结果提示益肾别浊汤具有显著的抗氧化应激的作用，这可能与升高SOD，降低iNOS水平有关。

综上所述，益肾别浊汤具有显著的肾脏保护作用，其中的机制可能是通过升高SOD，降低iNOS水平的表达有关，但限于经费原因，本研究并没有明确阐述其中的具体分子机制，这将是我们下一步的研究重点所在。