高效液相色谱法测定桑叶γ-氨基丁酸和谷氨酸
2019-01-21谌珍刘青茹张晓伟贺晶孙军燕刘婧
谌珍,刘青茹,张晓伟,贺晶,孙军燕,刘婧,*
(1.中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院,浙江杭州310016;2.烟台北方茶叶推广中心,山东烟台264009)
近年来,以 γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)为功效因子的新型功能食品被广泛开发应用,GABA具有降压、治疗癫痫、增强记忆力等功效,而一般植物组织中的GABA含量很低,不能满足人体生理需求,桑叶为药食两用原料,具有明显的降血压和降血糖功效,特别是其中所含的GABA含量平均能达到226 mg/100 g[1],而且我国桑叶种植广泛,是用来开发高γ-氨基丁酸茶的理想原料。桑叶中GABA是谷氨酸(glutamic acid,Glu)在谷氨酸脱羧酶的作用下水解而来,叶片中谷氨酸的含量也可以作为一个参照指标评价桑叶中γ-氨基丁酸提高的潜力。所以准确、高效测定桑叶中γ-氨基丁酸和谷氨酸的含量对于开发高γ-氨基丁酸桑叶茶尤为重要。
目前常用的测定γ-氨基丁酸的的方法主要分为高效液相色谱法[2-3]、Berthelot比色法[4-7]、改良纸层析法[8-9]。若采用纸层析法和比色法,因为桑叶内质成分复杂且含大量色素,会干扰γ-氨基丁酸和谷氨酸的测定,从而降低检测的精确性和灵敏度。而高效液相法测定结果准确,灵敏度高,可同时检测多种氨基酸。常用氨基酸柱前衍生试剂有异硫腈酸苯酯(phenyl isothiocyanate,PITC)、邻苯二甲醛(o-phthalaldehyde,OPA)、2,4-二硝基氟苯(2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB),PITC衍生时间短但操作繁杂,需要减压蒸馏去除多余衍生剂;OPA衍生反应迅速,但生成物不稳定,需快速进样,所以本试验选用2,4-二硝基氟苯作为衍生试剂,用高效液相色谱法同时测定γ-氨基丁酸和谷氨酸含量。同时简化样品前处理过程,确立提取的最佳参数,旨在建立准确、高效的γ-氨基丁酸和谷氨酸检测方法,为γ-氨基丁酸桑叶茶开发和利用提供理论与技术支持。……
