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沙门氏菌(Salmonella)是一种重要的人兽共患病原菌，在医学、兽医学和公共卫生方面均具有重要意义。该菌为兼性胞内寄生菌，其致病性主要与基因组上成簇分布的编码致病相关基因的特定区域—毒力岛(Salmonellapathogenicity island，SPI)有关。目前在沙门氏菌基因组上发现了约39个SPI，分别以SPI-1～SPI-39表示，其中SPI-1和SPI-2与致病性密切相关[1-2]。有研究报道，位于SPI-1上hilD基因编码的HilD在体外环境下，能对SPI-1的基因表达起调控作用，并且可以与位于SPI-2上的ssrAB启动子区域结合，诱导SPI-2上基因的表达，实现调控沙门氏菌SPI-1和SPI-2的作用[3-4]。然而，有关在体内环境中HilD对ssrAB表达调控的研究尚未见报道。

绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)因具有无细胞毒性、荧光性质稳定、分子量小、操作简单等特点，作为分子标记被广泛用于研究特定的环境下生物体的基因表达和蛋白定位监控等[5-6]。本试验以鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)为研究对象，秀丽隐杆线虫为模式生物，通过同源重组技术将编码绿色荧光蛋白的基因(gfp)插入pMD19-ssrAB质粒中构建pMD19-ssrAB-gfp重组质粒，再转入pWM91自杀质粒中构建pWM91-ssrAB-gfp重组自杀质粒，最终分别转入鼠伤寒沙门氏菌亲本株空质粒菌S.Typhi(pcDNA3.1)、hilD基因回补株S.Typhi(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)和hilD基因缺失株空质粒菌S.Typhi(ΔhilD+pcDNA3.1)中，经含有100 g/mL链霉素-氨苄青霉素的双抗LB琼脂培养基上筛选鉴定后，获得能够稳定表达GFP的标记菌株。将构建的带有GFP分子的标记菌株饲喂秀丽隐杆线虫，利用荧光显微镜观察在线虫体内标记菌株GFP表达和绿色荧光强度及其在线虫体内定殖和分布情况，初步探究体内环境下HilD与ssrAB表达之间的相互关系，为深入探究沙门氏菌HilD介导ssrAB表达调控奠定基础。……