杨汉才 甘保波 黄丽君 莫家金

广东省罗定市人民医院，广东罗定 527200

乙型病毒性肝炎临床主要表现为肝脏炎性病变特点，严重损害青少年健康，受到世界范围内关注。如延误诊治，部分患者恶化为肝癌或肝硬[1]。这就需要开展HBV诊断与治疗工作。一般临床在诊断标准中纳入特异血清病原学检查及肝功能检查，在满足条件情况下，检测HBV-DNA、DNA-p等，以此较好辨别疾病[2]。感染复制情况不容易判断，一些时候有漏洞出现。仅利用阳性表型指标无法很好辨识疾病，也不能展现患者体内乙肝病毒活动状况，使得病情评估不正确，发生较高误诊率，阻碍患者治疗，带来较高死亡率。定量PCR法的使用，可直接了解患者体内HBV复制与传染性，且便于选取治疗方案，准确判断疗效。为准确评估乙型病毒性肝炎，本院2016～2017年本院387例表面抗原阳性的患者采用荧光定量PCR（FQ-PCR）法检测患者乙肝病毒标记物阳性表型血清标本HBVDNA情况，现将具体情况分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016～2017年本院900多例表面抗原阳性的患者中选取387例作为研究对象，全部实施乙肝DNA检测。取387例HBV标记物模式的血清标本。全部患者中男200例，女187例；年龄17～67岁，平均（45.8±4.1）岁；体质量40～86kg、平均体质量（68.8±11.5）kg；单身150例，有配偶237例。

1.2 方法

乙肝两对半使用英科新创的试剂。乙肝DNA定量试剂使用达安基因试剂。乙肝两对半所用仪器：帝肯EVO-2dinical150/8。SIEMENS BEPⅢ；乙肝DNA定量所用仪器：罗氏cobasZ480实时荧光定量PCR系统、生物安全柜、上海安亭TGL-16gR高速冷冻离心机、杭州博日CHB-202恒温金属浴等。按照操作要求进行，通过酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测乙肝病毒标记物阳性表型血清标本。通过FQ-PCR法定量分析并检测乙肝病毒标记物阳性表型血清标本HBV-DNA，严格遵照操作要求开展。阳性，＞1.00+002IU/mL，阴性，＜1.00+002IU/mL。

1.3 评价标准

乙肝五项也称为乙肝两对半，依次为：（1）乙 肝 表 面 抗 原（HBsAg）、（2）乙 肝 表 面 抗 体（抗 -HBs）、（3）乙肝 e 抗原（HBeAg）、（4）乙肝e抗体（抗 -HBe）、（5）乙肝核心抗体（抗 -HBc）。其中，加号是阳性减号是阴性，分析并统计乙肝病毒标记物阳性表型血清标本HBV-DNA荧光定量测定结果。

1.4 统计学处理

将本次研究数据输入统计学软件SPSS22.0表格中，显著性检验组间乙肝病毒标记物阳性表型血清标本HBV-DNA阳性率。采用统计学软件SPSS18.0版对数据进行统计分析，计量资料以（±s ）表示，采用t检验，计数资料以百分数（%）表示，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乙肝病毒标记物阳性表型血清标本HBVDNA定量测定结果

HBV-DNA定量测定结果可知，在疑似乙肝患者血清标本387例中，HBV-DNA阳性187例，阴性200例，定量最高及最低分别为7.70E+009IU/mL、2.71E+003IU/mL。

2.2 乙肝病毒标记物阳性表型血清标本HBVDNA定量测定与HBV-M的关系

从ELLSA法检测乙肝5项与荧光定量PCR法检测结果情况看，与大三阳组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 乙肝病毒标记物阳性表型血清标本HBV-DNA经ELLSA法检测乙肝5项与荧光定量PCR法检测结果分析

3 讨论

乙型肝炎因为HBV而诱发的一类肝炎性疾病，这种疾病严重威胁人类健康及生命，是引起肝衰竭、肝硬化等不容忽视的一类因素[3]。这种疾病受到世界范围内关注，乙型肝炎诊疗历史较长，我国乙型肝炎患病率非常高，受到各临床学者重视，国内感染HBV人群较多。所以，预防与诊疗乙型肝炎具有突出的意义。

HBV表面标记物及乙肝5项如乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（抗 -HBs）、乙肝 e抗原（HBeAg）、乙肝 e抗体（抗 -HBe）、乙肝核心抗体（抗-HBc）依然被广泛地应用，同时表面标记物在检测患者传染性与病程方面起到突出作用，通过HBV表面标记物与乙肝5项在诊治疾病方面已经有一段时间，且得到普遍使用，表面标记物在传染性疾病检测方面起到重要价值，而ELISA检测方法因为受限于自身灵敏度影响其中病毒复制水平不高，如病毒复制水平较低，这种检测手段会使个体出现漏诊或误诊情况[3]。对这种疾病的诊断在以上方法基础上，诊断乙型肝炎患者上述五项外，然后结合血清HBV-DNA深入分析，如此较为科学、准确性，也更有效[4]。

PCR技术用于HBV-DNA水平定量检测当中，可用作HBV感染非常精确的一项指标，其在HBV复制、感染等一些方面发挥了突出作用[5-6]。而因为PCR测定需要昂贵仪器设备，且对医师人员提出了较高要求，无疑阻碍了这项技术使用[7]。

FQ-PCR为临床基因诊断提供了有效途径，定量HBV-DNA，真实呈现了HBV感染、复制状况，修正ELISA测定结果解释，完全封闭管检测的应用，无需进行PCR后处理，防止了交叉感染的出现；且使用实时检测技术，获得的Ct值与原始模板数量表现出一种线性关系，具有非常高定量准确率，相比普通PCR，更为灵敏，同时因为荧光探针的使用，以光电传统形式直接探测PCR扩增中荧光信号变化所得的定量结果，为此，具有非常高的光谱高精确性及DNA杂交高特异性，解决了常规PCR诸多不足，用于临床早期疾病诊断中，用于疾病评估及治疗结果的诊断[8]。

在临床诊断HBV感染经常使用的手段是ELISA法检测，这种检测是人体对HBV的免疫反应状态，也是现阶段诊断乙型肝炎比较常用的一项指标。HBeAg阳性者具有非常高的HBV-DNA定量阳性，从中可见，ELISA法检测乙肝两对半是非常不错的监测手段，但FQ-PCR能够准确无误呈现HBV-DNA复制水平变化，便于观察疾病病程及治疗效果。

有学者证明乙型肝炎HBsAb发生后，血清中依然存在DNA复制，而时间推移下，HBV-DNA的检出率开始减少[9]。鲍淑华[10]研究指出，对观察组进行具体比较后，活动期标记物表型和非活动期标记物表型比非活动期HBV-DNA水平要高，以鉴别病毒复制水平的形式引导临床病情诊治，这和此次研究结果有相似之处，为实验实施创造了良好条件。有研究[11]在ELISA检测基础上，采用PCR技术通过HBV-DNA检测手段测定各乙肝病毒标记物阳性表型组合，在各种阳性组合当中，乙型肝炎E抗体HBeAb、乙肝表面抗原HBsAg、乙肝核心抗体HBcAb中HBV-DNA水平为（5.4±1.3）E+004IU/mL。具有最高阳性组合比例，这个比例达到30.9%，乙肝表面抗原HBsAg、乙型肝炎E抗原HBeAg、乙肝核心抗体HBcAb阳性等组合中中HBVDNA水平为（1.2±0.3）E+004IU/mL。然后比例达至22.8%，（HBV-DNA水平在阳性组合ELISA检测出中有时会比其余组合低）乙肝病毒的高复制性，使其具有一定威胁性，仅借助阳性率检测，不能准确无误评估病情，如在其实验当中，比较并分析两组HBV-DNA水平，得知观察组HBV-DNA水平偏高，通过分析病毒复制水平来指导乙型病毒性肝炎的评估。

在本次研究中，结果：HBV-DNA阳性、阴性例数分别为187例、200例，定量最高、最低分别为7.70E+009IU/mL、2.71E+003IU/mL。和大三阳组比起来，差异有统计学意义（P＜0.05）。表明，通过酶联免疫吸附试验（ELISA法）、FQ-PCR法定量分析乙型病毒性肝炎HBV-DNA含量，具有较高诊断率，为患者临床治疗提供了合理有效的措施，从一定程度上可以体现机体HBV复制与感染状况[12-14]。

总之，通过酶联免疫吸附试验（ELISA法）、FQ-PCR法定量分析可准确呈现HBV-DNA复制情况，防止漏诊及误诊情况发生，此种检测手段成本低，操作较为方便，以此更好指导实践研究。