肠道病毒71型中和表位肽SP55、SP70及VP2-28在人血清中的抗体滴度特征研究

2018-12-21谢明玉蒋再学陆小梅陈秀英

吉林医学 2018年12期

关键词：动物模型血清研究

刘倩，彭琪，谢明玉，蒋再学，陆小梅，赖茅，陈秀英

(1.东莞市儿科研究所，广东东莞 523325；2.东莞市儿童医院，广东东莞 523325；3.广东药科大学附属第一医院中心实验室，广东广州 510080)

本文通过利用肠道病毒71型(EV71)阳性患者抗血清进一步对动物模型的中和表位肽进行筛选，研究动物中确定的表位肽与人抗血清的反应特征，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料：本研究选择2014年11月～2015年6月东莞市儿童医院手足口病入院患儿，经Taqman荧光探针PCR检测为肠道病毒通用型阳性，且EV71阳性的急性感染患儿。

1.2多肽序列及偶联：本研究选取小鼠和兔子动物模型筛选到的三个EV71中和表位肽SP55、SP70、VP2-28，并应用MEGA5.0软件将多肽序列与中国流行EV71的C4亚型进行序列比对。

1.3研究方法

1.3.1体外微量中和实验：取50 μl患儿血清按倍比稀释至96孔板中，加入100 TCID50 EV71病毒50 μg，37℃孵育1 h，加入Vero细胞，2×104细胞/孔。5% CO2，37℃培养4 d。观察病变情况，以未发生病变的最大稀释度作为血清的抗病毒滴度。

1.3.2酶联免疫反应：合成多肽使用碳酸缓冲液稀释至5 μg/ml，50 μl/孔，4℃包被过夜。2%BSA 37℃封闭1 h。弃封闭液，血清标本20 μl用含1%BSA的抗体稀释液按4倍稀释7个梯度，每孔加入抗体100 μl，每孔3个平行，37℃孵育1 h。PBST洗涤6次，5 min/次。羊抗人IgG二抗以及羊抗人IgM二抗用抗体稀释液按1∶1 000稀释，并等体积混合，每孔加入二抗100 μl，37℃孵育1 h，PBST洗涤6次，5 min/次。