谢彩华，班付国，闫若潜，王东方，张 煜，刘梅芬，赵雪丽，马震原，王华俊，王淑娟

（1. 河南省动物疫病预防控制中心，河南郑州 450008；2. 开封市动物卫生监督所，河南开封 475000）

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-andmouth disease virus，FMDV）引起的猪、牛、羊等家养及野生偶蹄动物共患的一种急性、恶性、高度接触性传染病，70多种动物对其易感[1-3]。该病传播途径多、速度快，曾在世界范围内多次暴发流行，造成巨大政治影响和经济损失[4-5]，为此世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告动物传染病。FMD也是危害我国养猪业最为严重的动物疫病之一，为此我国将其列为一类动物疫病，被纳入国家强制免疫计划病种。FMDV为小核糖核酸病毒科口蹄疫病毒属，最大颗粒直径为23 nm，最小为7～8 nm。目前已知FMDV在全世界有A、O、C、SAT1、SAT2、SAT3和AsiaⅠ型7种血清型，且各血清型之间的交叉保护力很差[6]。在我国和邻国流行的主要有O、A、AsiaⅠ三种血清型[7]。由于FMDV血清型较多，因此利用简单、快速、准确的检测方法，尽早作出型的鉴别诊断，对控制FMD至关重要。目前，世界口蹄疫参考实验室检测FMDV及定型的常规方法仍是ELISA、病毒分离、RT-PCR等[8-9]。实时荧光定量PCR（Fluorescent quantitative PCR， FQ-PCR）是一种新型诊断工具，具有敏感、快速、准确的特点，并能在快速扩增核酸同时，实现模板的定量测定[10-11]。目前发展起来的多联实时荧光PCR技术可以在同一个PCR反应中，通过Tm值分析来区分不同的核酸片段，这为同时检测多种病原提供了技术基础。本研究根据O、A、AsiaⅠ三种血清型 的FMDV保守基因序列，设计了能够检测到FMDV多种血清型的特异性通用型和A型检测引物，以及不同荧光素标记的MGB探针，建立了FMDV通用型、A型二重荧光定量RT-PCR检测方法，为FMD的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异的临床检测方法。……