高含量IgG牛初乳胶囊的安全性研究

2018-12-13金洪伟陈映新

中国乳业 2018年11期

文/金洪伟陈映新

（深圳市光明新区疾病预防控制中心）

牛初乳中富含多种免疫因子和生长因子等生理功能性成分，具有常乳无法比拟的特点[1]。在各种免疫因子中，免疫球蛋白是最引人注目的[2]。IgG是免疫球蛋白的一种，是人和动物血液中含量最高的免疫球蛋白[3]。关于牛初乳及IgG保健功能性的研究和报道很多，但安全性毒理学方面的研究鲜有文献报道，本文依据《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）的要求，开展高含量IgG的牛初乳胶囊产品安全性毒理学评价试验，包括急性毒性试验，遗传毒性试验［鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物肝微粒体酶试验（Ames试验）、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验）］和30 d喂养试验，通过试验验证其安全性。

1 材料与方法

1.1 样品

牛初乳胶囊为市售产品，其IgG含量为30%，样品为乳黄色粉末状，感官检查未见异常。该样品推荐用量为每日2 次、每次5 粒，每粒0.2 g，因此每人每日2 g（含IgG 0.6 g），如成人体重以60 kg计，则相当于0.033 g/kg·bw。

1.2 试验动物

SPF级ICR小白鼠和SPF级Wistar品系大白鼠，均购自北京维通利华实验动物技术有限公司。在SPF级动物实验中心（屏障环境）饲养，温度为21～23 ℃，湿度为55%～58%RH。试验动物所用的清洁级饲料购自北京科澳协力饲料有限公司。

1.3 试验方法

依据《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）进行急性毒性试验、遗传毒性试验和30 d喂养试验，遗传毒性试验包括鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物肝微粒体酶试验（Ames试验）、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验3 项。

1.4 结果统计

采用SPSS软件对所有试验数据进行统计学分析。

2 结果

2.1 急性毒性试验

牛初乳胶囊大鼠和小鼠的急性毒性试验结果见表1。在14 d的观察期间内，两性别大、小鼠一般状态良好，未出现任何中毒症状，无动物死亡。根据试验所设计的剂量，观察到的结果及大、小鼠急性毒性判定标准，可以认为牛初乳胶囊经口最大耐受量＞20.0 g/kg·bw（相对于人体推荐量的606 倍），属实际无毒物质。

2.2 Ames试验

牛初乳胶囊2 次Ames 试验结果分别见表2和表3。结果表明，在加与不加活化系统条件下，受检样品各试验菌株的回变菌落数均未超过阴性对照组的2 倍以上，故认为牛初乳胶囊对Ames试验菌株无致突变性。

表1 牛初乳胶囊大、小鼠急性毒性试验结果

表2 牛初乳胶囊第一次Ames试验结果

表3 牛初乳胶囊第二次Ames试验结果

表4 牛初乳胶囊对小鼠骨髓细胞微核发生率的影响

表5 牛初乳胶囊对雄性小鼠精子畸形的影响

表6 牛初乳胶囊对大鼠体重的影响

2.3 小鼠骨髓细胞微核试验

牛初乳胶囊小鼠骨髓细胞微核试验的结果见表4。经卡方检验统计分析，各试验组与阴性对照比较，差异无统计学意义（p＞0.05），阳性对照组（给予0.04 g/kg·bw的环磷酰胺）的微核率高于阴性对照组，且差异有统计学意义（p＜0.01）。本试验表明，牛初乳胶囊对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核发生率无影响。

2.4 小鼠精子畸形试验结果

牛初乳胶囊小鼠精子畸形试验的结果见表5。结果显示，各组动物均可见到一定数量的畸形精子，经秩和检验统计方法，给予环磷酰胺（0.04 g/kg·bw）的阳性对照组精子畸形率与阴性对照组相比差异有统计学意义（p＜0.01）；而各试验组动物的精子畸形率与阴性对照组相比差异无统计学意义（p＞0.05），表明牛初乳胶囊对小鼠精子畸形发生率无影响。

2.5 30 d喂养试验

2.5.1 一般状态观察

主要试验如下：①膨胀试验，包括自由膨胀和限制膨胀试验；②压汞试验，通过计算汞压入量间接确定孔隙的孔径大小，适合干燥试样；③核磁共振试验，通过核磁共振技术测定含水状态下的孔隙分布，测试原理见参考文献[13]；④XRD试验，通过XRD方法确定晶体矿物；⑤SEM试验，观察试样的微观形貌。

在整个试验过程中，各组动物一般状况良好，行为正常，未见任何中毒表现，亦无动物死亡。

2.5.2 对大鼠体重的影响

在30 d喂养过程中，牛初乳胶囊对大鼠体重增长的影响见表6。对大鼠每周体重进行方差分析处理，结果均无显著性差异（p＞0.05），说明牛初乳胶囊对大鼠体重的增长无显著影响。

表7 牛初乳胶囊对大鼠总食物利用率的影响

表8 牛初乳胶囊对血液学指标的影响

表9 牛初乳胶囊对大鼠白细胞分类的影响

2.5.3 对大鼠总食物利用率的影响

在30 d喂养过程中，牛初乳胶囊对大鼠体重增重、进食量、食物利用率的影响见表7。结果显示，对各剂量组动物的体重增重、进食量和食物利用率进行方差分析，各组间均无显著性差异（p＞0.05），表明牛初乳胶囊对大鼠的总食物利用率无显著影响。

2.5.4 对大鼠血液学指标的影响

大鼠红细胞、血红蛋白和白细胞的检测结果见表8。结果显示，红细胞计数、血红蛋白含量和白细胞计数均在正常值范围内，各试验组与阴性对照组相比均无显著性差异（p＞0.05），说明牛初乳胶囊对红细胞总数、血红蛋白含量和白细胞总数无显著影响。

牛初乳胶囊对大鼠白细胞分类的影响检测结果见表9。结果表明，雄性、雌性大鼠的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞均在正常值范围之内，且各试验组与阴性对照组相比无显著性差异（p＞0.05），说明牛初乳胶囊对各型白细胞均无显著影响。

2.5.6 对末期血液生化指标的影响

试验结束后处死动物，分离大鼠血清，检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、血糖（GLu）、白蛋白（ALb）、总蛋白（TP）、总胆固醇（TCH）、甘油三酯（TG）等指标（表10）。结果表明，剂量受试物组的各项指标与阴性对照组相比无显著性差异，说明牛初乳胶囊对大鼠血生化指标无显著影响。

2.5.7 病理检查结果

（1）大体解剖

用牛初乳胶囊对大鼠经口灌胃30 d后，对大体进行解剖检查，各组动物重要脏器未见明显病理改变和异常。