柯 俐，胡小芬，王子龙，曾志将，何旭江

(江西农业大学蜜蜂研究所,江西南昌330045)

蜜蜂是一种真社会性昆虫，其独特的生物学特性受到广泛关注，是神经生物学、行为学和分子生物学的新兴模式生物[1]。蜜蜂的基因转移及转基因技术是研究蜜蜂生物学的重要手段。目前，精子介导法[2-4]、电穿孔法[5-6]和基因定点编辑法[7]已在蜜蜂中进行了大量试验，但均未获得良好效果。

piggyBac转座子最早发现于在鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusiani)中，根据特征性的TTAA 四核苷酸靶位点在基因组上完成切除与转座。其与Minos、Hermes和mariner等其它的DNA转座子不同，piggyBac转座子家族因特异性识别TTAA序列并可以在基因组上自由移动，又被称为跳跃基因[8]。目前，piggyBac转座子在功能基因研究中拥有着强大的优势，具有转座频率高、转座后稳定，特别是物种适用性广泛等优点。该技术作为一种良好的外源基因导入手段，在许多鳞翅目和双翅目昆虫[9-11]中广泛应用。

目前，piggyBac在蜜蜂中的应用相对较少。2014年Schulte等[12]首次在蜜蜂中将piggyBac转座子与转座酶mRNA共注射，成功将外源性基因植入蜜蜂基因组中，并在子代中检测到荧光与插入染色体上位置。本研究基于piggyBac转座子系统，以西方蜜蜂为实验材料，利用显微注射技术将外源性Rubia红色荧光蛋白基因植入西方蜜蜂卵中，并检测其基因整合与荧光表达情况。该研究可为我国今后的蜜蜂转基因技术研究和分子育种技术提供科学理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验昆虫

本实验西方蜜蜂(Apismellifera)选自江西农业大学蜜蜂研究所实验蜂场饲养的3群意大利蜜蜂(Apismelliferaligustica)。……