黄薇隗，彭伟，江蓉，徐内卫，邓飞

癫痫是常见的中枢神经系统疾病，发病率可达0.006%以上[1]。基因多态性可以通过影响特定基因的转录或蛋白翻译，影响相关靶物质的表达，从而影响神经电冲动的传递。神经调节因子-1（neural regulatory factor，NRG-1）基因多态性可通过影响神经原鞘膜跳跃式传递的方式，影响局部神经元的异常放电，促进癫痫的发生发展[2-4]。本研究选取我院就诊的癫痫患者，探讨rs35753505、rs6994992和rs62510682基因型和等位基因位点的基因型分布，为揭示基因多态性对于癫痫发生的影响提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年2月至2016年3月我院治疗的颞叶癫痫患者124例为病例组，其中男73例，女51例；年龄19～29岁，平均年龄（25.13±7.81）岁。纳入标准：符合1989年ILEA公布的癫痫诊断标准；均为汉族；患者及家属知情同意并签署同意书。排除标准：有脑部外伤、皮质发育不良、精神发育迟缓等神经精神病变。同时选取汉族健康志愿者124例为对照组，其中男80例，女44例；年龄19～29岁，平均年龄（25.02±8.22）岁，2组性别、年龄差异无统计学意义（χ2=0.836，t=0.108，均P＞0.05）。

1.2 方法

基因多态性检测：取冻存的血清保存液体，10000 r/min离心5 min，TRIZOL法提取总RNA。70℃干浴3 min，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5 μL，37 ℃水浴60 min，室温放置5 min使其完全溶解，逆转录为cDNA。以βactin为模版，在反应体系中加入SYBR Green 1染料、上游引物、下游引物、dNTP，使得总体积达20 μL。反应条件为：93 ℃2 min、93 ℃ 1 min、55℃ 2 min，共40个循环。

PCR产物扩增后进行基因多态性检测：参考multiplexkit试剂盒（南京凯基生物科技有限公司）使用说明，加入各位点对应延伸引物进行单碱基测序反应。并在ABI1310（Life Technologies，美国）进行电泳，结果用GENEMAPPER软件（Life Technologies，美国）进行分析。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 2组Hardy-Weinberg平衡检验

本次研究共检测到NRG1基因的3个单核苷酸多态性（SNP）位点，包括rs35753505、rs6994992和rs62510682，2组各位点基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡，表明2组受试者的人群代表性较好，见表1。

2.2 NRG1基因多态性与颞叶癫痫易感性的关系

SNP rs35753505基因型和等位基因分布差异有统计学意义（P＜0.05），其中CC基因型者患颞叶癫痫的OR值为3.941（1.806～8.599），等位基因C的OR值为1.977（1.378～2.837）；SNP rs6994992等位基因分布差异有统计学意义（P＜0.05），其中CT基因型者患颞叶癫痫的OR值为1.018（1.378～2.837），等位基因 T 的OR值为 1.475（1.027～2.118）；SNP rs62510682基因型和等位基因分布差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

3 讨论

表1 2组受试者Hardy-Weinberg平衡检验

表2 NRG1基因多态性与颞叶癫痫易感性的关系

基因水平的改变可以通过影响转录或蛋白翻译等环节，影响神经元电冲动的传递[5,6]。基因多态性是靶基因的部分位点发生的基因突变，进而导致基因或基因型的改变，影响中枢神经系统神经元鞘膜的跳跃式电传递[7-9]。对于相关基因多态性的研究，可以为临床上癫痫的生物学治疗提供新的作用靶点。

NRG1基因是编码多巴胺末端修饰蛋白的重要基因，其rs35753505、rs6994992和rs62510682位点的多态性变化，可影响其蛋白活性，多巴胺的末端磷酸化或羟基化修饰的不足，导致多巴胺在中枢神经系统内的降解加快，浓度相对不足，通过负反馈促进神经元间的信号传递或电传递，导致患者出现癫痫大发作或部分性发作等症状[5,10]。研究显示，NRG1基因可激活海马神经元细胞的兴奋性电传动，加重病情[11,12]。

本研究发现，rs35753505、rs6994992和rs62510682这3个研究节点的人群分别符合Hardy-Weinberg平衡，提示本研究所选择的样本具有较为理想的代表性，统计结果较为可靠。SNP rs35753505基因型和等位基因分布差异，提示SNP rs35753505的分布异常可能参与了癫痫的发生发展，其中等位基因C的比例明显高于等位基因T，差异有统计学意义（P＜0.05）。等位基因C的比例上升，可通过促进下游转录蛋白的翻译，进而促进神经元鞘膜组织的新生，并增加神经元细胞膜间的电传导联系，促进局部神经元的异常同步放电。有研究者通过回顾性收集分析了92例样本量的临床资料，发现等位基因C在NRG1基因的多态性表达中具有显著的差异性分布趋势，其中SNP rs35753505的表达异常可以增加5%左右的癫痫的发作的出现[13,14]，这与本研究的结论较为一致。SNP rs6994992等位基因分布差异有统计学意义，且等位基因T的表达也明显高于等位基因C，考虑到SNP rs6994992等位基因分别的差异，可以通过接触抑制性神经元递质谷氨酰胺或磷酸腺苷等的释放，进而促进神经元轴突末梢间神经递质的传递，导致神经元同步放电的发生，促进病情的进展。本研究并未发现SNP rs62510682基因型和等位基因分布异常，考虑可能与样本量的选择、癫痫多态性问题的地区性差异及检测试剂盒等不统一有关。

综上所述，rs35753505、rs6994992可通过影响等位基因的多态性表达，可能在促进癫痫的发生发展过程中发挥了一定的作用。但鉴于本次研究的样本量较小，后续研究将增加样本量，采用多中心的临床研究探讨其内在关系。