夏 舒， 陈 钰， 李 昕， 张海燕， 刘仲明， 王 捷*

(1.华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006;2.广州军区广州总医院医学实验科， 广东广州 510010)

传统的核酸检测技术主要有聚合酶链式反应(PCR)、原位荧光杂交技术(FISH)[1]、DNA测序技术[2]等。PCR是目前运用最广泛的核酸分子检测技术，但依赖精密的控温设备及专人操作，使其只能在条件完备且专业化程度高的实验室应用。核酸等温扩增技术是20世纪90年代提出的新型核酸扩增技术，相比于PCR，其可以在恒定的温度下对核酸进行扩增，大大降低了对仪器的要求[3]。2006年，英国TwistDx Inc公司开发了一种重组酶聚合酶扩增(RPA)技术，RPA反应可在25～42 ℃恒温条件下快速完成核酸扩增[4]，反应条件宽松。目前RPA结合凝胶电泳[5]、侧流层析[6]和荧光探针法[7]等不同的结果判读方法，已开发出多种较为成熟的检测试剂盒[4]，但是判读方法难以做到快速且高灵敏地检测。电化学发光法(ECL)[8]检测具有灵敏度高、检测线性范围宽、抗干扰能力强和检测时间短等特点[9]。邢达和周小明等将PCR与ECL结合进行转基因[10]和基因突变[11]检测，方法具有较高的检测灵敏度。但是传统的电化学检测池由于样品残留问题，容易造成交叉污染[12]。采用一次性纸芯片[13]电极可避免该问题的产生，而且纸芯片电极具有检测用量少、成本低、操作方便等特点[14]。吴鲁丹[15]等将滚环扩增(RCA)与纸基ECL检测结合，对IgG的检测限达到0.15 fmol/L，但是RCA时间相对较长(>60 min),而且只适用于环形DNA或环状核酸，因此在实际运用中受到极大的限制。

本研究以含乙型肝炎病毒(HBV)基因片段的质粒为模板，设计特异性引物，上游引物标记三联吡啶钌，生物素标记下游引物，重组聚合酶扩增反应形成双标记扩增子，磁分离纯化后进行纸基ECL检测。将……