高小娥

（武汉职业技术学院，湖北武汉 430074）

人T淋巴细胞表面分布不同的CD分子，其中CD4、CD8在临床诊断上有重要意义[1-2]。CD4+T淋巴细胞又称T辅助细胞（成年人的相对值43.8%±9.0%），CD8+T淋巴细胞又称T抑制细胞（正常成年人相对值31.3%±7.0%），它们的比值（1.5～1.7）：1，可以在一定程度上反映人体的免疫机能。同时，HIV的攻击对象正是人体的CD4细胞，HIV感染者可以导致机体内CD4+T淋巴细胞的绝对数量减少，CD8+T淋巴细胞数量增加，CD4+、CD8+的比例失调，因此，CD4+/CD8+的比值能够直接反映人体免疫功能，是提供HIV感染患者免疫系统损害状况最明确的指标[3-4]。国外在20世纪90年代已将CD4+T淋巴细胞计数和CD4+/CD8+比值测定作为HIV/AIDS的一项重要的诊断依据，中国从2001年起也将CD4+T淋巴细胞计数作为HIV/AIDS诊断的一项标准。通常是采用流式细胞术[5]结合免疫荧光标记抗体技术进行计数和比值的测定。

常用抗体标记的荧光素有PI、PE、FITC、PerCP、CY5等，其中PE是一种分子量极大的藻胆蛋白，由于其天生具有光合作用的分子片段，使其能将所吸收的光能最大限度地传输，被广泛应用于标记技术中[6-7]。PE因其吸收光波长不同分为R-PE（488nm）、B-PE（568nm）、APC（633nm），R-PE的分子量为240kD，激发波长488～560nm，发射波长595nm，其激发波长和发射波长不同，可以使它易于与FITC及内源性荧光分子相区别，并且能够在同一激发波长下，与其他荧光素同时标记检测不同分子。目前国内引进的大多数流式细胞仪只装有一个激光光源488nm光源，因此，选用能被488nm光源激发的R-PE荧光染料作为标记CD4/CD8单克隆抗体的荧光素。

1 材料与方法

1.1 材料

R-PE购自Sigma公司，DTT购自Sigma公司，DEMO购自Sigma公司，SPDP购自Pharmacia公……