郭锦翠，张艳艳，杨振邦，牛泽人，张雪梅

（1.华北理工大学公共卫生学院，河北 唐山 063000；2.华北理工大学生命科学学院，河北 唐山 063000）

肿瘤是全人类面临的一个巨大公共卫生问题，肺 癌在所有恶性肿瘤死因中居首位[1]。肿瘤发生的主要原因之一是肿瘤对补体监视的免疫逃避[2]。膜结合性补体调节蛋白（membrane-bound complement regulatory proteins, mCRPs）在机体内能够与补体相互作用，动态调节补体的激活与抑制，在保护自身组织的同时还能有效杀灭外来有害成分[3]。CD59作为mCRPs中重要成分之一，与炎症、创伤及某些肿瘤等疾病有密切的关系[4-5]。研究表明，CD59在乳腺癌[5-6]、结肠癌[7]、肺癌组织[8]中显现出高表达。

基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）是人群中普遍存在的核苷酸改变，而启动子区的多态性影响基因的转录水平，进一步导致蛋白表达水平的改变，导致肿瘤和疾病的发生和发展[9]。本研究旨在探讨CD59启动子区遗传变异对基因转录的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料

质粒pGL3-Basic、pRL-SV40以及双荧光素酶报告基因检测、凝胶回收、质粒提取试剂盒购自美国Promega公司，LipofectamineTM2000试剂购自美国Invitrogen公司，限制性内切酶KpnⅠ、NheⅠ和连接酶T4 DNA分别购自美国New England Biolabs和日本TaKaRa公司。A549、NCI-H2030、NCI-H23非小细胞肺癌细胞株购自美国菌种保藏中心。

1.2 实验方法

1.2.1 启动子区SNP筛选 对国际共享数据库Ensembl中基因CD59启动子区SNP信息进行数据挖掘，将CD59基因转录起始位点上游扩展1 500 bp，筛选出可影响基因转录因子结合位点的SNP位点，规定在中国人群中的最小等位基因频率不＞0.05，采用转录因子数据库（www.gene-regulation.com）中的软件TRANSFAC分析软件预测对转录因子结合有影响的SNP位点，最终共筛选出1个SNP位点（CD59 rs79077373）。……