王慧，曹敏玲，左文彪，史琴

（贵阳中医学院 1.功能实验室，2.生理教研室，贵州 贵阳 550025）

脑内5-羟色胺（5-hydroxytryptamine, 5-HT）对睡眠和觉醒功能具有重要的调节作用，但5-HT浓度改变后通过何种途径引起大脑皮质兴奋性变化尚未明确。研究表明，三磷酸腺苷（ATP）及其嘌呤P2X受体在睡眠活动的稳态调控中起到重要的作用[1-3]，细胞内ATP逐渐升高与非快速动眼睡眠delta波活动相一致[4]；P2X受体激动剂增加NREM睡眠而P2X受体拮抗剂则抑制大鼠NREM睡眠；P2X7受体的蛋白表达水平能随着睡眠周期的改变而改变[5]。前期研究发现对氯苯丙氨酸（parachlorophenylalanine, PCPA）所致的脑内5-HT浓度下降能引起大鼠前额皮质ATP含量下降，Na+-K+ATP酶和Ca2+-Mg2+ATP酶的活性下降[6]，本研究进一步探讨中枢5-HT与P2X受体及受体后信号蛋白激酶的作用关系，探讨促眠药物可能的作用环节和靶点。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 清洁级SD雄性大鼠36只。体重200～220 g（湖北省实验动物研究中心，合格证号42000600010950），置于安静、温度保持恒定（22±2）℃、避免强光的环境中饲养7 d。

1.1.2 试剂与药物 PCPA、OxATP（非选择性P2X受体拮抗剂）、A438079（高选择性P2X7受体拮抗剂）和BzATP（P2X7受体激动剂）（购自美国Sigma公司），CaMKII和 PKC（美国 Abcam 公司）、P38 MAPK（CST）、二步法免疫组织化学（简称免疫组化）试剂盒（北京中杉金桥公司），DAB显色剂（北京索莱宝科技有限公司），BCA蛋白浓度测定试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司），cDNA合成试剂盒（Gene Copoeia），荧光定量试剂盒（大连宝生物工程有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 大鼠分组及处理 大鼠随机分为6组（每组6只）：正常组、对照组、PCPA组[300 mg/（kg·d），腹腔注射，连续3 d]、OxATP、BzATP及A438079干预组，除正常组外，动物用10%水合氯醛（0.3 ml/100 g）腹腔注射麻醉……