潘惠 汪元

【摘 要】目的：探討类风湿关节炎患者外周血中B细胞功能的变化及其与实验室指标、中医证候的关系。方法：选取60例类风湿关节炎患者，根据DAS28评分，分为高活动组24例，中低活动组36例；同时选取20例健康体检者为正常对照组。采用流式细胞仪检测B细胞计数、B细胞百分比；采用ELISA法检测抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、B细胞活化因子（BAFF）及其受体（BAFF-R）；采用免疫透射比浊法检测免疫球蛋白IgA、IgG、IgM，补体C3、C4及类风湿因子（RF）、C-反应蛋白（CRP）；采用全自动血沉分析仪检测红细胞沉降率（ESR）。结果：类风湿关节炎患者的B细胞计数、B细胞百分比、BAFF、BAFF-R较正常对照组明显增高（P < 0.05），且高活动组较中低活动组明显增高（P < 0.01）。

B细胞计数与RF、抗CCP抗体、ESR、CRP、C3、IgG呈正相关（P < 0.05）；B细胞百分比与抗CCP抗体、ESR、CRP、C4呈正相关（P < 0.05）；BAFF与抗CCP抗体、ESR、CRP、C3、IgG呈正相关（P < 0.05）；BAFF-R与CRP呈正相关（P < 0.05）。B细胞计数与关节肿胀、关节压痛、关节局部发热、疲倦乏力、舌质紫暗呈正相关（P < 0.05），B细胞百分比与关节肿胀、关节压痛、关节局部发热、纳食减少呈正相

关（P < 0.05），BAFF与关节肿胀、关节压痛、关节局部发热呈正相关（P < 0.05），BAFF-R与纳食减少、大便稀溏呈正相关（P < 0.05）。结论：类风湿关节炎患者的B细胞功能较正常人明显升高，与疾病活动度、中医证候呈正相关，说明B细胞功能变化可作为反映类风湿关节炎病情活动度的指标之一。

【关键词】 关节炎，类风湿；B细胞功能；疾病活动度；中医证候

Changes of B Cell Function in Patients with Rheumatoid Arthritis and Correlation Analysis

PAN Hui，WANG Yuan

【ABSTRACT】Objective：To investigate the changes of B cell function in peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis and their relationship with laboratory indexes and TCM syndromes.Methods：Sixty cases

of rheumatoid arthritis were selected and divided into a high activity group（24 cases），a middle and a low activity group（36 cases）according to DAS28 score，and 20 healthy subjects were selected as a normal control group.The B cell count and the percentage of B cells were detected by flow cytometry.The anti CCP antibody，BAFF and its receptor BAFF-R were detected by ELISA，and immunoturbidimetry was used to detect immunoglobulin IgA，IgG，IgM，complement C3，C4 and rheumatoid factor（RF）and C-reactive protein（CRP）.Erythrocyte sedimentation rate（ESR）was detected by automatic ESR analyzer.Results：The number of B cells，the percentage

of B cells，BAFF and BAFF-R in the patients with rheumatoid arthritis were significantly higher than those in the normal control group（P < 0.05），and those in the high activity group were significantly higher than the low activity group（P < 0.01）.The number of B cells was positively correlated with RF，anti CCP antibody，ESR，CRP，C3 and IgG（P < 0.05），and the percentage of B cells was positively correlated with anti CCP antibody，ESR，CRP and C4（P < 0.05）.BAFF was positively correlated with anti CCP antibody，ESR，CRP，C3 and IgG（P < 0.05）.BAFF-R was positively correlated with CRP（P < 0.05）.There was a positive correlation between B cell count and joint swelling，joint tenderness，joint local fever，fatigue and lingual purple（P < 0.05）.The percentage of B cells was positively correlated with joint swelling，joint tenderness，joint local fever，and reduction of food intake（P < 0.05）.BAFF was positively correlated with joint swelling，joint tenderness，and joint local fever（P < 0.05）.BAFF-R was positively correlated with food intake reduction and loose stool（P < 0.05）.Conclusion：The B cell function of patients with rheumatoid arthritis is significantly higher than that of normal people，and it is positively related to the degree of disease activity and TCM syndrome，indicating that the function of B cells can be used as one of the indexes to reflect the degree of activity of rheumatoid arthritis.

【Keywords】 arthritis，rheumatoid；B cell function；disease activity；TCM Syndromes

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种累及多关节的慢性、系统性自身免疫性疾病。发病机制不明，多认为与免疫紊乱相关。B细胞在RA发生、发展中起重要作用，近年来以B细胞为靶点治疗RA的研究逐渐成为热点，但也有研究表明在RA发病机制中，B细胞处于较次要的位置[1]。为进一步了解两者的关系，本研究通过检测B细胞计数、B细胞百分比、B细胞活化因子（BAFF）及其受体（BAFF-R）水平，了解RA患者B细胞功能变化特点，并探讨B细胞功能变化与疾病活动度及中医证候的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年6月至2017年10月在安徽中医药大学第一附属医院风湿免疫科住院的活动期RA患者60例为RA组，其中男19例，女41例；年龄20～74岁，平均（47.37±13.70）岁；

病程1～30年，平均（14.60±13.70）年。所有患者均符合2010年美国风湿病学会（ACR）/欧洲抗风湿病联盟（EULAR）共同提出的最新RA分类标准和评分系统。选取同期本院体检中心健康体检者20例为正常对照组，其中男6例，女

14例；年龄26～71岁，平均（50.45±13.79）岁。2组在性别、年龄等方面比较，差异无统计学意义

（P > 0.05），具有可比性。60例RA患者依据DAS28评分标准[2]，24例DAS28评分> 5.1分为高活动组，36例DAS28评分≤5.1分为中低活动组。

1.2 排除标准 ①重叠其他风湿病者，如系统性红斑狼疮、干燥综合征、严重的膝骨关节炎等；

②合并心血管、脑、肺、肝、肾和造血系统等严重疾病或近期有严重感染者；③妊娠或哺乳期妇女；④精神病患者以及无民事行为能力者。

1.3 伦理学要求 本研究经安徽中医药大学第一附属医院伦理委员会批准，受试对象知情同意。

1.4 检测指标与方法 详细记录患者性别、年龄、病程；采用问卷方式进行中医证候的评分；采用免疫透射比浊法检测C-反应蛋白（CRP）、类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、免疫球蛋白IgG、IgA、IgM，补体C3、C4；采用全自动血沉仪检测红细胞沉降率（ESR）；抽取研究对象空腹静脉血3 mL左右，取全血于24 h内采用流式细胞仪法检测B细胞计数、B细胞百分比，试剂盒购自杭州艾森生物有限公司（生产批号B000087）；留取血清并于-80 ℃冻存，标本收集完整后采用ELISA法检测BAFF、BAFF-R，试剂盒购自北京安迪华泰生物科技有限公司（生产批号E-12403&201703、E-10095&201703）。所有检测步骤均按照说明书进行操作。

1.5 统计学方法 采用SPSS 22.0软件进行统计分析。正态分布资料以表示，偏态分布资料以中位数（四分位数间距）表示；组间比较满足正态分布采用两独立样本t检验或校正t检验，偏态分布采用Mann-Whitney（U）检验；计数资料采用Pearson χ2检验或校正χ2检验；相关性检验正态分布采用Pearson相关分析，偏态分布采用Speraman相關分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组B细胞功能比较 B细胞计数、B细胞百分比、BAFF及BAFF-R，RA组较正常对照组明显增高（P < 0.05），高活动组较中低活动组明显增高（P < 0.01）。见表1。

2.2 RA患者B细胞功能与实验室指标的相关性 相关性分析结果显示，RA患者的B细胞计数与RF、抗CCP抗体、ESR、CRP、C3、IgG呈正相关

（P < 0.05）；B细胞百分比与抗CCP抗体、ESR、CRP、C4呈正相关（P < 0.05）；BAFF与抗CCP抗体、ESR、CRP、C3、IgG呈正相关（P < 0.05）；BAFF-R与CRP呈正相关（P < 0.05）。见表2。

2.3 RA患者B细胞功能与中医证候的相关性 相关性分析结果显示，B细胞计数与关节肿胀、关节压痛、关节局部发热、疲倦乏力、舌质紫暗呈正相关（P < 0.05）；B细胞百分比与关节肿胀、关节压痛、关节局部发热、纳食减少呈正相关（P < 0.05）；

BAFF与关节肿胀、关节压痛、关节局部发热呈正相关（P < 0.05）；BAFF-R与纳食减少、大便稀溏呈正相关（P < 0.05）。见表3。

3 讨 论

3.1 B细胞计数与B细胞百分比 B细胞在抗原

的刺激下可分化为浆细胞，通过浆细胞合成和分泌自身抗体、免疫球蛋白，介导体液免疫应答；而

B细胞的过量表达可引起自身免疫性疾病，特别是与RA的发病关系密切。早有研究发现RA患者滑膜下层及血管周围有大量的B淋巴细胞浸润[3]，还有研究发现RA外周循环及滑膜等组织中检测的B细胞可通过参与产生自身抗体、活化T细胞、分泌炎性细胞因子[4-6]等参与RA的炎性反应和骨破坏。本研究发现，RA患者B细胞计数、B细胞百分比较正常对照组明显增高，高活动组较中低活动组明显增高，提示RA患者体内B细胞水平明显增高，且与病情活动度呈正相关。本研究还发现，B细胞计数与RF、抗CCP抗体、ESR、CRP、C3、IgG呈正相关，B细胞百分比与抗CCP抗体、ESR、CRP、C4呈正相关，进一步说明RA患者过量表达的B细胞与特异性自身抗体和免疫球蛋白的产生、补体的激活及炎症反应的增强密切

相关。

3.2 BAFF与BAFF-R BAFF是肿瘤坏死因子配体超家族成员，是B淋巴细胞生长、分化和发育所需的重要免疫调控因子。研究表明，BAFF可通过抑制蛋白磷酸酶2A激活Erk1/2通路促进

B細胞的生存和增殖[7]；BAFF还通过与其细胞表面的受体结合产生信号发挥重要调节作用，如促进幼稚B细胞的分化和成熟，及抗体的产生和类型转换[8]，目前已知BAFF有3个受体：B细胞成熟抗原、穿膜蛋白活化物和B细胞活化因子受

体[9]，其中BAFF-R是BAFF的特异性受体，在外周B细胞上表达[10]，能够专一与BAFF上的二硫键结合[11]，是介导B细胞存活的主要受体[12]。研究发现，BAFF通过与其特异性受体结合，介导PI3K/AKT/mTOR信号转导通路，上调Bcl-2家族成员，可诱导抗凋亡蛋白Bcl-xL的表达，促凋亡蛋白Bad、Bim磷酸化等，从而抑制促凋亡蛋白，削弱凋亡，增加B细胞存活[13]。

本研究显示，RA患者BAFF、BAFF-R较正常对照组明显增高，高活动组较中低活动组明显增高，且BAFF与抗CCP抗体、ESR、CRP、C3、IgG与呈正相关，BAFF-R与CRP呈正相关。早有研究表明，病情严重的RA患者滑液中可检测到高浓度BAFF、BAFF-R[14]；RA患者血清中BAFF水平明显升高，并与RF、ESR、CRP、PLT呈正相关[15]；BAFF的过度表达会造成B细胞免疫耐受失衡，导致RA的发生[16]。可见，RA患者体内B细胞异常升高与高表达的BAFF、BAFF-R相关，且BAFF、BAFF-R与RA病情活动度呈正

相关。

3.3 RA患者B细胞功能与中医证候的相关性分析 RA属中医学“尪痹”范畴，大多病程缠绵，而见关节肿胀、关节压痛、关节局部发热、疲倦乏力、纳食减少、大便稀溏、舌质紫暗等诸症，本研究依据《中药新药临床研究指导原则》[17]，将RA归属为“脾虚湿盛、脉络痹阻”证候，早有研究发现脾虚湿盛、脉络痹阻是RA发生、发展过程中的主要致病因素[18]，贯穿RA发展的始终，与RA患者的病情密切相关。本研究结果显示，B细胞计数与关节肿胀、关节压痛、关节局部发热、疲倦乏力、舌质紫暗呈正相关，B细胞百分比与关节肿胀、关节压痛、关节局部发热、纳食减少呈正相关，BAFF与关节肿胀、关节压痛、关节局部发热呈正相关，BAFF-R与纳食减少、大便稀溏呈正相关，说明B细胞功能与RA的中医证候呈正相关，可作为指导临床辨证用药及判断中医药疗效的实验室指标之一。

4 结 语

越来越多的证据表明，B细胞的异常活化可能在多种自身免疫性疾病的发病中起关键作用。B细胞调节网络及其特异性调节生物制剂已经成为研究热点，本研究通过探讨B淋巴细胞功能的变化及其与活动性指标、中医证候的关系发现，RA患者B细胞功能较正常对照组明显增高，高活动组较中低活动组明显增高，B细胞功能与RA疾病活动性指标及中医证候呈正相关，说明RA患者

B细胞功能变化是反映病情活动性的指标之一，为临床判断RA病情、以B细胞为靶点治疗RA、中医药治疗RA提供了依据，有助于阐明RA的相关发病机制，为进一步治疗RA提供了新思路。只有深入研究RA发病机制，才能有望寻找到更有效的治疗策略，从而改善患者的指标及症状。但本研究未排除患者入选前用药情况分析及药物干预治疗后上述指标的变化，下一步将进行更深入的

研究。

5 参考文献

[1] 王勇，牟方祥，钟兵，等.活动期类风湿关节炎患者外周血T，B淋巴细胞及NK细胞表达变化的意义[J].中国医药导报，2017，14（11）：12-14.

[2] FELSON DT，ANDERSON JJ，BOERS M，et al.American college of rheumatology preliminary definition of improvement in rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheum，1995，38（6）：727-735.

[3] 葛均波，徐永健，梅长林.内科学[M].北京：人民卫生出版社，2013：808-814

[4] KLEYER A，FINZEL S，RECH J，et al.Bone loss before the clinical onset of rheumatoid arthritis in subjects with anticitrullinated protein antibodies[J].Ann Rheum Dis，2014，73（5）：854-860.

[5] SUN JB，XIANG Z，SMITH KG，et al.Important role for FcγRIIB on B lymphocytes for mucosal antigen-induced tolerance and Foxp3+ regulatory T cells[J].J Immunol，2013，191（8）：4412-4422.

[6] TAKEMURA S，KLIMIUK PA，BRAUN A，et al.T cell activation in rheumatoid synovium is B cell dependent[J].

J Immunol，2001，167（8）：4710-4718.

[7] LIANG D，ZENG Q，XU Z，et al.BAFF activates Erk1/2 promoting cell proliferation and survival by Ca2+-CaMKII-dependent inhibition of PP2A in normal and neoplastic Blymphoid cells[J].Biochem Pharmacol，2014，87（2）：332-343.

[8] STOHI W.Biologic differences between various inhibitors of the BLyS/BAFF pathway：should we expect

differences belimumab and other inhibitors in develop

（下轉第32页）

（上接第20页）

ment？[J].Curr Rheumatol Rep，2012，14（4）：303-309.

[9] SHU HB，HU WH，JOHNSON H.TALL-1 is a novel member of the TNF family that down-regulated by mitogens[J].J Leukoc Biol，1999，65（5）：680-683.

[10] CHEN M，LIN X，LIU Y，et al.The function of BAFF on T helper cells in autoimmunity[J].Cytokine Growth Factor Rev，2014，25（3）：301-305.

[11] LIU Y，HONG X，KAPPLER J，et al.Ligand-receptor binding revealed by the TNF family member TALL-1[J].

Nature，2003，423（6935）：49-56.

[12] RYAN MC，GREWAL IS.Targeting of BAFF and APRIL for autoimmunity and oncology[J].Adv Exp Med Biol，2009，647：52-63.

[13] 张玲玲，魏伟.BAFF/BAFF-R通过PI3K/Akt/mTOR信号转导通路调节B淋巴细胞功能在类风湿关节炎发病机制中的意义[J].中国药理学通报，2010，26（7）：847-850.

[14] WOO YJ，YOON BY，JHUN JY，et al.Regulation of B cell activating fator（BAFF）receptor expressin by NK-κB signaling in rheumatoid arthritis B cells[J].Exp Mol Med，2011，43（6）：350-357.

[15] 王晓磊.类风湿关节炎B淋巴细胞刺激因子及CD19CD25B细胞亚群的研究[D].石家庄：河北医科大学，2009.

[16] STOHL W，METYAS S，TAN SM，et al.B lymphocyte stimulator overexpression in patients with systemic lupus erythematosus：longitudinal observations[J].Arthritis Rheum，2003，48（12）：3475-3486.

[17] 国家食品药品监督管理局.中药新药临床研究指导原

则[M].北京：中国医药科技出版社，2002：115.

[18] 曹永贺，刘健.从脾论治类风湿关节炎的研究概

述[J].风湿病与关节炎，2014，3（6）：65-67.

收稿日期：2018-05-19；修回日期：2018-06-29