陈琪，刘晓峰

(江西省九江市第一人民医院，九江 332000)

在聚合酶链式反应 （Polymerase Chain Reaction，PCR）过程中，引物的 3’端不依赖模版相互作用生成大量非特异性产物，尤其是引物二聚体[1]。有研究报道，在两引物的3’端只要有一个碱基互补配对，30个循环即可生成引物二聚体[2]。许多实验通过引物的优化设计、控制反应条件、热启动和酶的优化等方法来减少引物二聚体的生成[3，4]，但引物浓度较高时，这些方法不能减少引物二聚体的生成。因此，引物二聚体被认为是PCR反应过程中的必然产物，严重干扰实时荧光定量PCR、反转录酶-聚合酶链式反应 （reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR）等实验结果[5-7]。然而引物二聚体是否具有一定的功能，纵观国内外文献却鲜有报道。本实验组利用粉尘螨1类变应原基因的重组质粒pET28a(+)-ProDer f 1为模版，以ProDer f 1特异性引物形成的二聚体为引物进行PCR扩增，成功扩增出ProDer f 1基因，验证了回收的引物二聚体依然具有特异性引物的功能，现将详细结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 质粒、菌株和引物 含有粉尘螨1类变应原基因的重组质粒pET28a(+)-ProDer f 1和大肠埃希菌 （Escherichia colin，E.coli）DH5α 感受态细胞本实验室自制并保持；根据GenBank公布的ProDer f 1（AB034946.1）基因序列设计特异性引物，ProDer f 1-F：TATGGATCCCGTCCAGCTTCAAT CAAAACT，ProDer f 1-R：GGCCTCGAGTCACATG ATTACAACATATGG，理论扩增出目的基因为912bp。

1.1.2 主要试剂和仪器 SK2072即用PCR扩增试剂盒 （Taq）、SanPrep柱式 DNA胶回收试剂盒、SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒、250bp DNA Marker(SM0311)、50bp DNA Marker(BSM0371)均购自生工生物工程 （上海）有限公司；ABI2720型PCR仪、Beckman高速冷冻离心机、Bio-Rad水平电泳仪、SYNGENETM凝胶电泳成像分析系统。

1.2 方法

1.2.1 引物二聚体的生成与回收 生成引物二聚体PCR 体 系 （27μl）：10 ×PCR Buffer 2.5μl，MgCl2（25mmol/L）2μl，dNTPs （2mmol/L）2.5μl，ProDer f 1正、 反向引物各 0.5μl，Taq DNA 聚合酶（5U/μl）0.5μl，ddH2O 18.5μl，蘸取含有 pET28a(+)-ProDer f 1的阳性菌落吹打混匀。……