周伟 吴进 林晓光 林凯 郑红波

摘要 目的：观察活血膏对骨性关节炎模型大鼠運动能力的干预效应，同时评估其对关节软骨超微结构以及Wnt/β-catenin信号通路标志性蛋白表达的影响。方法：将30只SD大鼠随机分为空白组、模型组以及活血膏组，每组10只。其中模型组及活血膏组大鼠接受4%木瓜蛋白酶关节腔注射以复制骨性关节炎模型，随后活血膏组大鼠接受活血膏外用涂抹，连续干预14d，比较3组大鼠关节腔软骨下骨组织形态学、软骨形态以及软骨组织Wnt-2、β-catenin含量的变化。结果：1）接受造模的大鼠膝关节活动度明显低于空白组，其中活血膏组大鼠膝关节活动度大于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05）。2）模型组大鼠骨小梁出现明显硬化现象，局部存在断裂，骨小梁排列顺序紊乱，可见骨赘形成，活血膏组大鼠骨小梁排列明显较模型组整齐，断裂现象明显减少。接受造模大鼠BS/BV较空白组升高，Tb.Th及Tb.N均较空白组下降，其中活血膏组较模型组改善，差异均有统计学意义（P<0.05）；3）HE染色显示空白组大鼠软骨面形态正常，基质着色均匀正常，潮线清晰可见；模型组大鼠软骨出现不同程度的纤维化，软骨细胞数量减少，潮线模糊不清；活血膏组软骨细胞较模型组增多，可见部分潮线。4）WesternBlot检测法提示模型组软骨组织Wnt-2、β-catenin含量较空白组明显升高，活血膏组虽较空白组上调但较模型组明显降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：活血膏对骨性关节炎大鼠的软骨及软骨下骨有保护效应，其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路表达有关。

关键词 膝骨性关节炎；大鼠；软骨；软骨下骨；活血膏；Wnt-2；β-catenin

AbstractObjective：ToobservetheinterventioneffectofHuoxueointmentonthemotorfunctionofosteoarthritisrats，andtoevaluateitseffectontheultrastructureofarticularcartilageandtheexpressionofWnt/β-cateninsignalingpathway.Methods：Atotalof30SDratswererandomlydividedintoblankgroup，modelgroupandHuoxueointmentgroup，with10ratsineachgroup.ThemodelgroupandHuoxueplastergroupweretreatedwithintra-articularinjectionof4%papaintoreplicatetheosteoarthritismodel，thenHuoxueointmentgroupweretreatedwithexternalapplicationofHuoxueointment，interventionfor14consecutivedays.Ratarticularsubchondralbonetissuemorphology，cartilagemorphologyandcartilagetissueWnt-2，beta-cateninofthreegroupswerecompared.Results：1）Theactivityofthekneejointinthemodelratswassignificantlylowerthanthatintheblankgroup，andthemotionrangeofthekneejointsinHuoxueointmentgroupwasgreaterthanthatinthemodelgroup.Thedifferencewasstatisticallysignificant（P<0.05）.2）Thetrabecularboneshowedobvioushardeningphenomenoninthemodelgroup.Therewerelocalfractures.Thetrabeculararrangementwasdisorder.Theformationofosteophytewasobserved.ThebonetrabeculararrangementinHuoxueointmentgroupwassignificantlymorethanthatinthemodelgroup，andthefracturephenomenonwassignificantlyreduced.BS/BVofratswithmodelestablishmentelevatedsignificantlycomparedwithcontrolgroup，andTb.ThandTb.Nwerelowerthanthatinblankgroup.Thehuoxueointmentgroupimprovedcomparedwiththemodelgroup，andthedifferenceswerestatisticallysignificant（P<0.05）.3）HEstainingshowedthattheratsincartilagematrixoftheblankgrouphadnormalmorphology，anduniformcoloringwasnormalwithvisibleandcleartideline.Thecartilageinmodelgroupshoweddifferentdegreesoffibrosis，andthenumberofcartilagecellswasdecreased.Thetidallinewasblurred；ChondrocytesofHuoxueointmentgroupincreasedincomparisonwiththemodelgroup，andpartofthetidallinewasvisible.4）WesternBlottestshowedthattheWnt-2andβ-cateninlevelsofcartilagetissueinmodelgroupweresignificantlyhigherthanthoseinblankgroup，whileHuoxueointmentgroupwashigherthanthatinblankgroup.Itwassignificantlylowerthanthatinmodelgroup，andthedifferencewasstatisticallysignificant（P<0.05）.Conclusion：Huoxueointmentcanprotectcartilageandsubchondralboneinosteoarthritisrats，anditsmechanismmayberelatedtoinhibitingtheexpressionofWnt/β-cateninsignalingpathway.

KeyWordsKneeosteoarthritis；Rats；Cartilage；Subchondralbone；Huoxueointment；Wnt/β-catenin

中图分类号：R285.5文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.06.046

当关节软骨产生退行性改变或继发性骨质增生后导致骨性关节炎的形成（KneeOsteoarthritis，KOA），明显降低了生命质量，因膝关节是KOA最易受累的关节，故又称膝骨性关节炎[1-2]。尽管KOA具有极高的发病率，但治疗方法确明显滞后于其他类型的关节炎，目前以非甾体消炎药为主，虽在一定程度可减轻患者的临床症状，但其对消化道破坏的不良反应严重影响了治疗依从性。中医药以其疗效显著、不良反应少的优势逐渐受到临床工作者的青睐，其在KOA领域的疗效临床亦不乏报道[3-5]。KOA属于中医学“骨痹”“痛痹”范畴，肝肾不足，气滞血瘀是膝骨关节炎的主要病机，因此补益肝肾，益气活血化瘀是其治疗的原则。本团队经过临……