北京市东城区食品药品安全监控中心（100050）王丽霞

1 仪器与试剂

1.1 仪器 Waters2695高效液相色谱仪，2487紫外检测器；赛多利斯BP211D电子天平，赛多利斯CP124S电子天平。

1.2 试药 消旋瑞格列奈对照品(批号：100863-201101，中国食品药品检定研究院，含量：100.0%)；瑞格列奈对照品(批号：100753-201303，中国食品药品检定研究院，含量：99.8%)；瑞格列奈片(A厂，规格1.0mg，批号：*****938B)；瑞格列奈片(A厂，规格2.0mg，批号：*****144A，批号：*****167A)；瑞格列奈片(B厂，规格0.5mg，批号：***720，***711，***909)；瑞格列奈片(C厂，规格1.0mg，批号：***006，***023，***022)；瑞格列奈片(D厂，规格1mg，批号：***103)；乙腈（色谱纯），实验用水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：大赛璐α1-酸性糖蛋白手性色谱柱(4.0mm×100mm，5μm)；流动相：磷酸盐缓冲液（磷酸二氢钾2.72g，加水800ml使溶解，用氢氧化钠调节pH值至7.0，加水稀释至1000ml摇匀）为流动相A，乙腈为流动相B；流速1.0mL·min-1；梯度洗脱，洗脱表见附表。检测波长240nm；柱温30.0℃；进样量：20μL。

附图 系统适用性HPLC谱图。A消旋瑞格列奈对照品溶液；B瑞格列奈对照品溶液；C瑞格列奈片供试品溶液；D瑞格列奈片对照溶液；E甲醇；F水

附表 洗脱梯度表

2.2 溶液的制备 ①消旋瑞格列奈对照品溶液 精密称取消旋瑞格列奈对照品约10mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀。②瑞格列奈对照品溶液 精密称取瑞格列奈对照品约10mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀。③供试品溶液 精密称取瑞格列奈片细粉适量，置50mL量瓶中，加甲醇15mL使瑞格列奈溶解，用水稀释至刻度，摇匀，滤过。④对照溶液 精密量取供试品溶1mL，置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。⑤溶剂 分别取甲醇、水。

2.3 系统适用性试验 分别取消旋瑞格列奈对照品溶液、瑞格列奈对照品溶液、供试品溶液、对照溶液溶液、溶剂甲醇、溶剂水，以“2.1”色谱条件分析，色谱图见附图，瑞格列奈保留时间3.671min，理论板2788，左旋异构体保留时间6.139min，理论板6297，瑞格列奈与左旋异构体完全分离，系统条件满足要求。

2.4 精密度实验 取消旋瑞格列奈对照品溶液，以“2.1”色谱条件，重复进样5次，求得瑞格列奈峰面积的RSD分别为0.92%，左旋异构体峰面积RSD为1.28%。

2.5 稳定性实验 取消旋瑞格列奈对照品溶液，以“2.1”色谱条件，在0h，1h，2h，4h，6h，20h，24h重复进样，测定峰面积，计算瑞格列奈峰面积的RSD分别为1.53%，左旋异构体峰面积RSD为1.41%，24h内溶液基本稳定。

2.6 检测限 取消旋瑞格列奈对照品溶液逐步稀释，以“2.1”色谱条件进样，以左旋异构体峰面积信噪比为3/1为条件，测量检测限，得消旋瑞格列奈进样浓度0.2μg·mL-1，左旋异构体浓度为0.1μg·mL-1。

2.7 样品中左旋异构体检查 分别对四个厂家9批次瑞格列奈片，以“2.1”色谱条件进样，结果均未检出左旋异构体杂质。

3 结果与讨论

3.1 本文采用《中国药典》2015年版方法对4厂家9批次瑞格列奈片中左旋异构体杂质检查，均未检出左旋异构体，满足药典中左旋异构体含量不得高于1.0%的要求。

3.2 该方法流动相采用梯度洗脱方式，达到瑞格列奈及其左旋异构体的分离，瑞格列奈与左旋异构体保留时间分别在3min与6min左右，在《中国药典》2015年版洗脱时间10min后，方法设置时建议继续洗脱几分钟使管路中流动相的比例切换至流动相A/流动相B为90∶10，保证仪器序列自动进样时，体系能够达到平衡。

3.3 本文采用的方法为《中国药典》2015年版法定方法，经过对方法的系统适用性、精密度、稳定性方法学考察，该方法瑞格列奈与左旋异构体能够完全分离，体系相对稳定。