曾 桥,韦承伯,韩国锋,韦文龙,蒋佳琪

(1.陕西科技大学食品与生物工程学院,陕西西安 710021;2.陕西科技大学轻工科学与工程学院,陕西西安 710021;3.陕西农产品加工技术研究院,陕西西安 710021;4.陕西朴道茯茶股份有限公司,陕西咸阳 713700)

桑叶为桑科(Moraceae)植物桑(MorusalbaL.)的叶,又名铁扇子[1],兼具食药用价值,《中国药典》记载其有疏散风热、清肺润燥、清肝明目等功效,用于风热感冒、肺热燥咳、头晕头痛、目赤昏花[2],由于食药用历史悠久,1993年原国家卫生部将其列为药食同源物质。现代药理研究结果表明,桑叶含有丰富的黄酮、多糖、氨基酸、生物碱等活性成分,具有降血糖[3]、降血脂[4]和胆固醇[5]、抗氧化[6]、调节内分泌、改善消化系统[7]、抗肿瘤[8]等作用。桑叶在我国分布广泛,产量巨大,除少量用于养蚕和药用外,每年有大量的桑叶未得到有效的利用而浪费。近年来,随着人们对桑叶的研究及认识的深入,以桑叶为原料开发具有一定保健功能的食品,从而提高其利用价值越来越受到人们的重视。

随着人们生活水平的提高和保健意识的增强,具有保健功效和投资增值的传统发酵茶受到了广大消费者的青睐,这其中尤其以茯砖茶的发展最为迅速,成为茶品市场上的新亮点。茯砖茶属后发酵茶,是所有茶类中加工工艺最复杂、生产加工周期最长、工艺最独特的黑茶类产品[9]。茯砖茶内质金花普茂,菌香浓郁,开汤后汤色红浓,滋味醇和,香气纯正[10],具有消食健胃、降脂减肥、降血糖、抗肿瘤、保肝护肝等功效。桑叶属于可再生资源、产量大、价格低廉,加之有制茶的历史,是制作茯砖茶的理想原料。通过将桑叶发酵制作成桑叶茯砖茶,对于提高桑叶利用率,增加产品附加值,促进农民增收具有重要意义。

本文前期以桑叶为原料,经采摘、干燥、渥堆、汽蒸、成型、发花、陈化等工艺制作而成桑叶茯砖茶的基础上,进一步对桑叶茯砖茶多糖提取工艺进行优化研究,并考察桑叶茯砖茶多糖的抗氧化活性及降血脂作用,从而为桑叶茯砖茶的饮用以及进一步开发提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

桑叶茯砖茶 所用原料桑叶为霜桑叶,2016年11～12月采摘于陕西汉中勉县,经陕西科技大学药学系鉴定为桑科植物桑(MorusalbaL.)的叶,后在陕西朴道茯茶股份有限公司制作而成;葡萄糖标准品 上海源叶生物科技有限公司,纯度≥98%;胃蛋白酶 上海源叶生物科技有限公司,BR,1∶250;胰蛋白酶 上海源叶生物科技有限公司,USP级,1∶30000;浓硫酸、浓盐酸、水杨酸 国药集团化学试剂有限公司;氢氧化钠、30%双氧水 天津市科密欧化学试剂有限公司;苯酚、过硫酸钾、无水乙醇、铁氰化钾、抗坏血酸(VC) 天津市天力化学试剂有限公司;硫酸亚铁 广东光华科技股份有限公司;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、ABTS二胺盐、甘氨胆酸盐、牛磺胆酸盐 上海源叶生物科技有限公司。

TU-1810紫外分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司;FA1004N电子分析天平 上海精密科学仪器有限公司;DZ-2BC型真空干燥箱 天津市泰斯特仪器有限公司;RE52CS-1旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂;GZX-9246MBE电热鼓风干燥箱 上海博迅实业有限公司医疗设备厂;TD5A大容量低速离心机 长沙英泰仪器有限公司;电热恒温水浴锅 北京科伟永兴仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 桑叶茯砖茶预处理 取桑叶茯砖茶1块(500 g),将其掰开捏碎,置于50 ℃真空干燥箱中干燥至恒重后,粉碎过60目筛,得桑叶茯砖茶粉末备用。

1.2.2 桑叶茯砖茶多糖水提工艺流程 精密称定桑叶茯砖茶粉末→热水提取→冷却至室温→离心(4000 r/min)15 min→取上清液→抽滤→得多糖提取液。

1.2.3 多糖含量的测定

1.2.3.1 标准曲线的绘制 精密称取干燥至恒重葡萄糖标准品10 mg,用蒸馏水溶解定容至100 mL,得0.1 mg/mL葡萄糖标准储备液备用。精密量取葡萄糖标准储备液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL,分别置于10 mL容量瓶中,加蒸馏水稀释定容,摇匀,得浓度分别为0、10、20、30、40、50、60 μg/mL的葡萄糖标准工作液。精密量取各浓度葡萄糖标准工作液2 mL至具塞锥形瓶中,加入5%苯酚溶液1 mL,摇匀,迅速加入浓硫酸5 mL,摇匀,于沸水浴中水解15 min,取出,冷却至室温,待测。另取蒸馏水2 mL按上述条件处理作空白对照。于490 nm处测吸光度。以标准溶液浓度(X)为横坐标,吸光度(Y)为纵坐标绘制标准曲线。

1.2.3.2 桑叶茯砖茶多糖含量的测定 精密称取1.2.1中的桑叶茯砖茶粉末2 g,按1.2.2中的方法进行操作获得桑叶茯砖茶多糖提取液,用蒸馏水定容至100 mL,进一步精密吸取1.0 mL至50 mL容量瓶中,用蒸馏水定容;进一步地精密吸取2 mL至具塞锥形瓶中,按1.2.3.1“加入5%苯酚溶液1 mL……待测”操作,另取蒸馏水2 mL按上述条件处理作空白对照。于490 nm处测吸光度。将所测吸光度值代入葡萄糖标准曲线回归方程中,计算得样品溶液中多糖的浓度,按稀释倍数计算得多糖含量。

1.2.3.3 桑叶茯砖茶多糖得率的计算

多糖得率(%)=[(Y×V×D)/(B×106)]×100

式中:Y为多糖浓度(μg/mL);V为样品溶液体积(mL);D为稀释倍数;B为原料重量(g);106为质量换算系数。

1.2.4 单因素实验 以桑叶茯砖茶多糖得率为考察指标,分别考察提取温度、提取时间、液料比以及提取次数对得率的影响。

1.2.4.1 提取温度对桑叶茯砖茶多糖得率的影响 精密称取桑叶茯砖茶试样2 g,在提取次数为1次,提取时间为2 h,液料比为20 mL/g下,分别考察提取温度40、50、60、70、80、90 ℃对桑叶茯砖茶多糖得率的影响。

1.2.4.2 提取时间对桑叶茯砖茶多糖得率的影响 精密称取桑叶茯砖茶试样2 g,在提取次数为1次,提取温度为80 ℃,液料比为20 mL/g下,分别考察提取时间为0.5、1、1.5、2、2.5 h对桑叶茯砖茶多糖得率的影响。

1.2.4.3 液料比对桑叶茯砖茶多糖得率的影响 精密称取桑叶茯砖茶试样2 g,在提取次数为1次,提取时间为2 h,提取温度为80 ℃下,分别考察液料比为8∶1、12∶1、16∶1、20∶1、24∶1、28∶1、32∶1 mL/g对桑叶茯砖茶多糖得率的影响。

1.2.4.4 提取次数对桑叶茯砖茶多糖得率的影响 精密称取桑叶茯砖茶试样2 g,在提取时间为2 h,液料比为20 mL/g,提取温度为80 ℃下,分别考察提取次数为1、2、3次对桑叶茯砖茶多糖得率的影响。

1.2.5 响应面实验设计 在单因素实验的基础上,以提取温度,提取时间以及液料比为自变量,利用Design Expert 8.0.6软件进行三因素三水平的Box-Behnken中心组合实验设计,其实验因素和水平设计见表1。

表1 Box-Behnken实验设计因素和水平表Table 1 Factors and levels of Box-Behnken design

1.2.6 体外抗氧化活性研究

1.2.6.1 DPPH自由基清除活性测定 参照文献[11]稍加改进。称取一定量DPPH粉末,用无水乙醇配制成浓度为0.1 mmol/L的DPPH溶液。用蒸馏水将桑叶茯砖茶多糖母液稀释成8、16、24、32、40、48、56、64、72、80 μg/mL的浓度梯度。取10支洁净具塞试管,分别依次加入DPPH溶液2 mL,各浓度梯度桑叶茯砖茶多糖溶液2 mL,剧烈振摇,室温放置30 min,以蒸馏水调零,于517 nm处测吸光度记为A样品。用蒸馏水代替DPPH溶液按上述方法处理测定吸光度记为A对照,以蒸馏水代替桑叶茯砖茶多糖提取液按上述方法处理测定吸光度记为A空白。同时,以VC为阳性对照。按下式计算DPPH自由基清除率:

DPPH自由基清除率(%)=[1-(A样品-A对照)/A空白]×100

1.2.6.2 ABTS+·清除活性测定 参照文献[12]和[13]稍加改进。将8.1 mmol/L ABTS溶液与3.2 mmol/L过硫酸钾溶液等体积混合,暗处放置16 h,使用时用无水乙醇稀释至其在734 nm 波长处A为0.70左右。分别取质量浓度为10、30、50、70、90、110、130 μg/mL桑叶茯砖茶多糖提取液1 mL置于具塞试管中,加入4 mL ABTS+·溶液,室温避光反应6 min,在734 nm下,测其吸光度记为A样品;以1 mL蒸馏水代替桑叶茯砖茶多糖溶液为空白组,测吸光度记为A空白,以上测定时均以蒸馏水调零。同时,以VC为阳性对照。按下式计算ABTS+·清除率:

ABTS+·清除率(%)=(1-A样品/A空白)×100

1.2.6.3 ·OH清除活性测定 参照文献[14]稍加改进。于不同试管中分别加入质量浓度为0.175、0.35……1.75、1.925 mg/mL桑叶茯砖茶多糖溶液2 mL,每支试管依次加6 mmol/L 的FeSO4溶液2 mL,6 mmol/L的H2O2溶液2 mL,摇匀,静置10 min,进一步加入6 mmol/L的水杨酸溶液2 mL 摇匀,于37 ℃水浴30 min,0.45 μm微孔滤膜滤过,以蒸馏水调零,于510 nm 测吸光值,记为A样品。以蒸馏水代替桑叶茯砖茶多糖提取液按上述方法测定吸光度,记为A空白;用蒸馏水代替水杨酸按上述方法测定吸光度,记为A对照。同时,以VC为阳性对照,按下式计算·OH清除率:

·OH清除率(%)=[1-(A样品-A对照)/A空白]×100

1.2.7 降血脂作用研究

1.2.7.1 绘制胆酸盐标准曲线 参照文献[15]的方法,略作修改,分别绘制甘氨胆酸盐和牛磺胆酸盐标准曲线。取不同浓度的标准溶液(甘氨胆酸盐0.03、0.06、0.12、0.18、0.24、0.30 mmol/L,牛磺胆酸盐0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 mmol/L)2 mL分别置于不同具塞试管中,分别加入6 mL质量分数60%的H2SO4溶液于70 ℃水浴20 min,取出冰浴5 min,在387 nm波长处测定吸光度。以胆酸盐含量为横坐标,吸光度为纵坐标分别绘得甘氨胆酸盐和牛磺胆酸盐标准曲线。

1.2.7.2 胆酸盐结合实验 参照文献[15]的方法,略作修改,移取质量浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mg/mL桑叶茯砖茶多糖溶液3 mL于100 mL具塞三角瓶中,每个三角瓶分别加入10 mg/mL胃蛋白酶溶液3 mL和0.01 mol/L的HCl溶液1 mL,在37 ℃下恒温水浴振荡消化1 h(模拟胃消化环境)。随后以0.1 mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至6.3,加入10 mg/mL胰蛋白酶溶液4 mL,在37 ℃下恒温水浴振荡消化1 h(模拟肠道环境)。每个样品中加入0.4 mmol/L甘氨胆酸盐4 mL或0.5 mmol/L牛磺胆酸盐4 mL,继续恒温水浴振荡1 h,于4000 r/min离心20 min,取上清液,于387 nm处测定吸光度值,按照标准曲线计算剩余甘氨胆酸盐和牛磺胆酸盐含量,所加入甘氨胆酸盐或牛磺胆酸盐总量减去剩余量所得差值与总量的比值即为结合率,以百分比表示。

1.3 数据处理

所有实验均重复3次,响应面优化实验数据采用Design-Expert 8.0.6软件进行二次回归分析及方差分析,其余实验结果均采用Graph Pad Prism软件进行处理。

2 结果与分析

2.1 葡萄糖标准曲线的绘制

按1.2.3.1项下规定所绘制的葡萄糖标准曲线,回归方程为:y=0.0671x+0.0021,相关系数R2=0.9998,线性关系良好。

图1 葡萄糖标准曲线Fig.1 Standard curve of glucose

2.2 单因素对桑叶茯砖茶多糖得率的影响

2.2.1 提取温度对桑叶茯砖茶多糖得率的影响 如图2所示,提取温度在40～50 ℃区间内时,桑叶茯砖茶多糖得率随温度的升高而增大,在50 ℃时,得率最大,这是由于温度越高,分子热运动越快,多糖溶出速度也就快,此外,温度升高还能增加多糖溶解度。当温度超过50 ℃继续升高时,多糖得率则开始缓慢下降,这是因为过高的温度会使得多糖部分水解从而造成得率下降。因此,合理的提取温度为50 ℃,这与文献[16-17]研究的多糖最适提取温度为70～80 ℃不同,可能的原因包括桑叶多糖和其他种类多糖在结构上可能有区别,另外,茯砖茶制作过程中,由于高温高湿的环境以及微生物的作用,可能导致糖的组成和结构发生变化[18],从而使得桑叶茯砖茶多糖的最佳提取温度发生变化。

图2 提取温度对桑叶茯砖茶多糖得率的影响Fig.2 The effect of extraction temperature on the polysaccharide extraction rate from mulberry leaves of fu brick tea

2.2.2 提取时间对桑叶茯砖茶多糖得率的影响 由图3可知,随着提取时间的延长,桑叶茯砖茶多糖的得率先呈较快的增长,但是当提取时间增加到1.5 h后,得率趋于平稳甚至有缓慢下降趋势。由于在初始阶段,提取液中多糖浓度较低,因而溶出就较快,随着提取时间的延长,提取液中多糖浓度逐渐增大,溶液逐步趋于饱和达到平衡状态,从而导致多糖溶出速率降低,因此,在后期延长提取时间,得率变化不大。综合考虑能耗和节约时间等因素,选择最佳提取时间为1.5 h。

图3 提取时间对桑叶茯砖茶多糖得率的影响Fig.3 The effect of extraction time on the polysaccharide extraction rate from mulberry leaves of fu brick tea

2.2.3 液料比对桑叶茯砖茶多糖得率的影响 由图4可知,当液料比小于12∶1 mL/g时,桑叶茯砖茶多糖的得率随着液料比的增加显著增大,当液料比大于12∶1 mL/g时,多糖得率继续缓慢增加,当液料比大于16∶1 mL/g时,多糖得率明显降低,而当液料比大于24 mL/g时,桑叶茯砖茶多糖的得率则呈缓慢降低的趋势。这可能是由于水量过大导致后续工序能耗增加,效率降低[19]。因此,桑叶茯砖茶多糖提取的最佳液料比确定为16∶1 mL/g。

图4 液料比对桑叶茯砖茶多糖得率的影响Fig.4 The effect of liquid-solid ratio on the polysaccharide extraction rate from mulberry leaves of fu brick tea

2.2.4 提取次数对桑叶茯砖茶多糖得率的影响 由图5可知,当提取次数为1时,桑叶茯砖茶多糖得率为11.10%,复提之后合并提取液,多糖得率为11.80%,得率变化极显著(p<0.01),累计3次,多糖总得率为11.79%,得率变化不显著(p>0.05)。虽然提取2次和1次相比,多糖得率变化极显著(p<0.01),然而得率仅增加0.70%,若以最大得率11.80%为对照,提取1次即可获得桑叶茯砖茶中94.07%的多糖,而增加提取次数不仅增加能耗,而且浪费时间,从经济角度考虑,选择提取1次为宜。

图5 提取次数对桑叶茯砖茶多糖得率的影响Fig.5 The effect of extraction times on the polysaccharide extraction rate from mulberry leaves of fu brick Tea

2.3 响应面优化桑叶茯砖茶多糖提取工艺

2.3.1 Box-Behnken中心组合实验设计及结果 在单因素实验基础上,根据Box-Behnken中心组合实验设计原理,确定以提取时间(A)、液料比(B)、提取温度(C)为基础设计三因素三水平共17组响应面分析实验。实验因素和水平设计见表1,实验方案设计及结果见表2。

表2 Box-Behnken中心组合实验设计及结果Table 2 Design and results of Box-Behnken experiment

2.3.2 回归模型的建立及显著性分析 以桑叶茯砖茶多糖得率为响应值,对中心组合的实验结果进行回归分析,获得一个二次多项回归方程:

Y=-71.46543+9.44485A+1.01308B+2.60778C-0.071741AB-0.015790AC+1.10438×10-3BC-2.34874A2-0.029232B2-0.025601C2

表3 回归方程方差分析Table 3 Variance analysis of regression equation

2.3.3 响应面优化分析 采用Design Expert 8.0.6软件绘制得响应面曲面图和等高线图,如图6～图8,分别表示提取时间(A)和液料比(B)、提取时间(A)和提取温度(C)、液料比(B)和提取温度(C)的交互作用的响应曲面图和等高线图。

图6 提取时间和液料比对桑叶茯砖茶多糖得率影响的响应面图Fig.6 Response surface of effects of extraction time and liquid-solid ratio on the polysaccharide extraction rate from mulberry leaves of fu brick tea

图7 提取时间和提取温度对桑叶茯砖茶多糖得率影响的响应面图Fig.7 Response surface of effects of extraction time and extraction temperature on the polysaccharide extraction rate from mulberry leaves of fu brick tea

图8 提取温度和液料比对桑叶茯砖茶多糖得率影响的响应面图Fig.8 Response surface of effects of extraction temperature and liquid-solid ratio on the polysaccharide extraction rate from mulberry leaves of fu brick tea

由图6a可知,提取时间和液料比对桑叶茯砖茶多糖得率的影响较显著,当液料比一定时,多糖得率随提取时间的延长而增加,但是当时间延长到一定程度后继续延长时间,多糖得率则开始下降。图6b等高线图表明,在液料比和提取时间两个因素中,时间对多糖得率的影响较液料比大。图7a和图8a响应面图表明,提取温度和提取时间以及提取温度和液料比对桑叶茯砖茶多糖得率的影响均较显著,当提取温度一定时,多糖得率随提取时间的延长先增大后减小,随液料比的增大先增大后减小。图7b等高线图表明,当液料比一定时,等高线图呈圆形,表明提取时间和温度交互作用不显著。图8b等高线图表明,在液料比和提取温度两个因素中,温度对多糖得率的影响较液料比大。

在单因素实验基础上,采用响应面法对桑叶茯砖茶多糖提取工艺进行优化,经模型预测,最佳提取条件为:提取时间1.59 h,液料比为16.34∶1 mL/g,提取温度50.80 ℃,提取次数为1次,在此最佳工艺条件下,桑叶茯砖茶多糖得率为10.55%。考虑到实际操作可行性和方便性,对各个工艺参数稍作修改,即最佳工艺条件为:提取时间1.6 h,液料比16∶1 mL/g,提取温度51 ℃,提取次数1次,平行进行3次验证性实验,桑叶茯砖茶多糖得率为10.43%(SD=0.1123),与预测值相对误差为1.14%,表明该最佳条件参数准确、可行。

2.4 桑叶茯砖茶多糖体外抗氧化降血脂活性研究

2.4.1 体外抗氧化活性评价

2.4.1.1 DPPH自由基清除作用 从图9可以看出,桑叶茯砖茶多糖对DPPH自由基具有较好的清除作用,其对DPPH自由基的清除效果随浓度的增大而增大,当桑叶茯砖茶多糖浓度大于56 μg/mL时,继续增大浓度,清除率增加缓慢。当桑叶茯砖茶多糖浓度达到80 μg/mL时,其对DPPH自由基的清除率达到84.35%。

图9 不同质量浓度桑叶茯砖茶多糖对DPPH自由基清除作用Fig.9 Scavenging activity of polysaccharide from mulberry leaves of fu brick tea at various concentrations against DPPH free radicals

2.4.1.2 ABTS+·清除作用 由图10可以看出,桑叶茯砖茶多糖对ABTS+具有较好的清除作用,清除能力较VC弱。随着桑叶茯砖茶多糖质量浓度的增大,对ABTS+的清除率呈上升趋势。当质量浓度大于70 μg/mL时,继续增大浓度,清除率增加缓慢,当质量浓度达到130 μg/mL时,其对ABTS+的清除率可达72.30%。

图10 不同质量浓度桑叶茯砖茶多糖对ABTS+·清除作用Fig.10 Scavenging activity of polysaccharide from mulberry leaves of fu brick tea at various concentrations against ABTS+·

2.4.1.3 对·OH的清除作用 由图11可知,随着桑叶茯砖茶多糖和VC质量浓度的上升,对·OH的清除率呈上升趋势,当质量浓度为0.875 mg/mL时,桑叶茯砖茶多糖对·OH的清除率为56.10%,继续增大浓度,清除能力增加缓慢。当桑叶茯砖茶多糖浓度为1.75 mg/mL时,对·OH的清除率为74.08%,此时清除能力达到最大值,继续增大浓度,清除率不再增加。

图11 不同质量浓度桑叶茯砖茶多糖对·OH自由基清除作用Fig.11 Scavenging activity of polysaccharide from mulberry leaves of fu brick tea at various concentrations against ·OH

2.4.2 体外降血脂研究

2.4.2.1 甘氨胆酸盐和牛磺胆酸盐标准曲线 甘氨胆酸盐标准曲线回归方程为:y=3.4857x+0.0047,R2=0.9995,线性关系良好。

牛磺胆酸盐标准曲线回归方程为:y=2.3696x+0.0051,R2=0.9992,线性关系良好。

2.4.2.2 桑叶茯砖茶多糖对胆酸盐的结合能力 研究表明,胆汁酸能够促进脂类水解和吸收,若胆汁酸被其他物质结合,则膳食中脂肪的吸收和利用便会得到抑制,从而达到降低血脂的目的。此外,一些食品成分能与胆汁酸结合,加速体内胆固醇的分解,有效降低人体血清和肝中胆固醇的含量。正常人胆汁酸中90%为结合型胆汁酸,在体内一般以钠盐形式存在,本研究选取甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠为结合对象,模拟人胃和肠道的环境,考察桑叶茯砖茶多糖对二者的结合能力,从而评价其降血脂效果[15,20]。

图12 甘氨胆酸盐标准曲线Fig.12 Standard curve of glycine sodium cholate

图13 牛磺胆酸盐标准曲线Fig.13 Standard curve of taurine sodium cholate

从图14可以看出,桑叶茯砖茶多糖和甘氨胆酸盐、牛磺胆酸盐的结合量均随多糖浓度的增大而增大。当多糖浓度达到2.5 mg/mL时,桑叶茯砖茶多糖和牛磺胆酸盐、甘氨胆酸盐的结合率分别达到58.28%和39.95%,继续增加浓度,结合率上升缓慢。当浓度达到3.5 mg/mL时,桑叶茯砖茶多糖和牛磺胆酸盐、甘氨胆酸盐的结合率分别达到59.96%和41.97%。桑叶茯砖茶多糖与牛磺胆酸盐的结合量比甘氨胆酸盐的结合量多,即桑叶茯砖茶多糖与牛磺胆酸盐的结合能力更强。胆酸盐结合实验结果表明,桑叶茯砖茶多糖降血脂作用较好。

图14 桑叶茯砖茶多糖对胆酸盐结合能力Fig.14 The capacity of polysaccharide from mulberry leaves of fu brick tea to bind sodium cholate

3 结论

在单因素实验基础上,采用响应面法优化了桑叶茯砖茶多糖的提取工艺,结果表明,最佳提取工艺为提取时间1.6 h,液料比16∶1 mL/g,提取温度51 ℃,提取次数1次,在此最佳条件下,桑叶茯砖茶多糖得率为10.43%。体外抗氧化研究结果表明,桑叶茯砖茶多糖具有较好的抗氧化活性,其对DPPH自由基、ABTS+、·OH的清除能力随多糖浓度的增大而增大,呈现一定的剂量-效应关系。胆酸盐结合实验结果表明,桑叶茯砖茶多糖对甘氨胆酸盐和牛磺胆酸盐均有较强的结合能力,相较于甘氨胆酸盐,桑叶茯砖茶多糖对牛磺胆酸盐的结合能力较强,说明桑叶茯砖茶多糖具有较好的降血脂作用。

本文所用桑叶为霜桑叶,即初霜后采收干燥而得,此阶段的桑叶药用价值最高。采用茯砖茶加工工艺制作而成的桑叶茯砖茶具有普通茯砖茶金花普茂,菌香浓郁,开汤后汤色红浓,滋味醇和,香气纯正等特征[10],其品质较普通桑叶茶大大提高。桑叶茯砖茶多糖含量丰富,具有较好的抗氧化活性和降血脂等保健作用,长期饮用对身体有益。采用水提法对所用桑叶原料中的多糖进行提取,得率为12.83%,较桑叶茯砖茶多糖含量高,这可能是由于茯砖茶发酵过程中,冠突散囊菌部分利用了其中所含的多糖[21]。冠突散囊菌是茯砖茶发酵过程中的优势菌,其生长繁殖能产生大量有益的次生代谢产物,因而冠突散囊菌的数量是评价茯砖品质的重要指标。后续研究过程中,应进一步探讨桑叶茯砖茶发酵过程中多糖的含量变化与冠突散囊菌生长繁殖的相关性,从而调控冠突散囊菌的生长代谢过程,这对于指导桑叶茯砖茶的生产具有重要作用,可以在保证产品品质的同时,尽量减少多糖的损失,以最大程度发挥桑叶茯砖茶的保健功效。