向江艳 詹炉停 赵 敏 张 伟 郑子峥 夏宁邵

(厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室，厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心,厦门361102)

呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus，hRSV或RSV)是一种单股负链RNA病毒，属于副黏液病毒科肺炎病毒属[1,2]，是引起全球范围内婴幼儿下呼吸道感染的主要病原之一，两周岁以内的婴幼儿几乎都感染过RSV[3]。RSV感染后，机体会激发中和抗体及T细胞免疫反应，两者均在病毒清除后逐渐衰退，从而导致一生中反复感染RSV[4]。

RSV基因组共有10个基因，编码11个蛋白[5]，其中L蛋白(Large nucleoprotein)为RSV的RNA聚合酶，包含2 165个氨基酸，分子量为250 kD[6]，是RSV病毒颗粒中最大的蛋白，也是核衣壳的重要组分，P与N[7,8]、L以及M2-1蛋白[9]相结合形成核衣壳；另外，N与P蛋白共定位包涵体，为病毒核酸合成提供场所[10]。目前对RSV L蛋白的结构、结构与功能的关系研究还不够深入，病毒感染复制过程中RNA合成机制以及核相关蛋白在不同阶段的表达情况及相互作用尚无明确阐述。本研究通过对L蛋白进行肽段展示来制备线性表位抗体，为今后病毒感染机制及疫苗研究提供检测试剂。

1 材料与方法

1.1实验材料、试剂和仪器 大肠杆菌DH5α菌株、293FT和骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14(Sp2/0)、载体pC149-mut(简称HBc)与F1代腹水小鼠(本实验室提供)；6～8周雌性BALB/c小鼠(SPF级)(上海斯莱克公司)；ER2566菌株(NEB公司)；Full-L、GFP质粒及Hep2细胞、RSV A2病毒(美国NIH疫苗研究中心馈赠)；限制性核酸内切酶、T4 DNA连接酶(华美生物工程公司)；Taq-DNA聚合酶、逆转录酶AMV和RNasin(Promega公司)；Trizol(Roche公司)；RNaseA、DNase Ⅰ、氨基蝶呤、PEG1500、DAPI、FITC荧光标签抗抗体及弗氏佐剂(美国Sigma公司)；胎牛血清和小牛血清(Hyclone公司)；……