张 伟 涂敏芳 邓焕华

(威海市中医院，威海264200)

近年来，研究发现Th17细胞是一类新的CD4+T细胞亚群，它能够特异性地产生细胞因子IL-17[1，2]；而核孤儿受体-γt(ROR-γt)是它的特异性转录因子[3]，ROR-γt可诱导Th17细胞的产生及分化。IL-17具有强大的招募中性粒细胞的作用。因此，Th17细胞介导了中性粒细胞性哮喘气道炎症的发生[4]。本实验研究拟通过验证以下假说来说明中性粒细胞性哮喘气道炎症的信号转导通路：转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)与IL-6作为启动因子，促进幼稚的CD4+T细胞通过JAK-STAT通路向Th17转化，而ROR-γt是它的特异性转录因子，诱导Th17的产生与分化，并分泌炎性因子IL-17，IL-17可招募大量的中性粒细胞，从而引发中性粒细胞性哮喘。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1动物 SPF级SD雄性大鼠24只，体重200～220 g,由苏州工业园区爱尔麦特科技有限公司提供(合格证编号：No.201508901)，动物在实验前适应性驯养1周，饲养环境为江西中医学院热敏灸重点实验室，室温25℃，空气湿度50%，通风条件良好。

1.1.2主要试剂和仪器 10%卵白蛋白、脂多糖、TGF-β、IL-6、IL-17酶联免疫试剂盒(Sigma公司生产)；氢氧化铝[Al(OH)3]溶液(广州化学试剂厂)；FITC conjugated anti-CD4、PE-Cy7-conjugated anti-IL-17(eBioscience)；ROR-γt抗体、β-actin 抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司)；PCR引物(上海生工)；反转录试剂盒、Real time PCR mastermix(全式金生物技术有限公司)；Trizol(Invitrogen公司)；超声雾化器(型号：402AI上海鱼跃医疗设备有限公司)；酶标仪(型号：Multiskan mk3，芬兰雷勃公司)；凝胶成像分析系统(型号：ChemiDoc MP Bio-Rad公司)；分光光度仪(型号：Nano Drop 2000，Thermo Fisher Scientific公司)；高速冷冻离心机(型号：Micro 21R,Thermo Fisher Scientific公司)；多用途旋转摇床(型号：QB-206，海门其林贝尔仪器制造有限公司)；Real time PCR仪(型号：ABI7500，Applied biosystems)；SDS-PAGE电泳仪(型号：PowerPac，Bio-Rad公司)；转膜仪(型号：Trans-Blot Turbo，Bio-Rad公司)；流式细胞仪(CytoFLEX，Beckman Coulter有限公司)；光学显微镜(型号：IX73，OLYMPUS公司)。……