徐 琦 王 龙 顾丹今 伍 婷 任聪改 周 勇 程路峰

(新疆医科大学基础医学院，乌鲁木齐830011)

类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一种在世界范围内普遍存在的，以全身多个关节滑膜组织炎症和关节退化为主要表现，可致关节畸形或功能丧失的慢性自身免疫性关节疾病[1]。RA的病因及发病机制复杂，滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cells，Tfh)是近年来新发现的T细胞亚群[2]，研究表明Tfh与有些自身免疫病病情的严重程度呈现正相关[3]，且该细胞亚群主要辅助B细胞活化、增殖、分化和分泌免疫球蛋白，而大量高亲和力抗体的分泌可诱发炎症反应[4]。Tfh表面表达的CXCR5+和ICOS可促进B细胞分化及记忆B细胞的形成[5]。目前RA的临床治疗原则是缓解疼痛，减轻或缓解炎症的发展,甲氨蝶呤(Methotrexate，MTX)作为慢作用抗风湿药，具有免疫抑制与抗炎症的作用在临床上广泛使用[6,7]，但其在治疗过程中对机体Tfh细胞的影响鲜有报道，本研究以胶原性关节炎小鼠模型为基础，研究甲氨蝶呤治疗RA的过程中对Tfh细胞数量表型、功能及转录因子的影响及其作用机制，为临床用药及配伍药物治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1实验材料、试剂 牛Ⅱ型胶原及完全弗氏佐剂购自Sigma公司；甲氨蝶呤购自江苏恒瑞医药股份有限公司；布洛芬购自山西太原药业有限公司；PE-Cy7标记的CD3抗体、PerCP-Cy5.5标记的CD4抗体、PE标记的CXCR5抗体、FITC标记的ICOS抗体均购自eBioscience公司；ELISA试剂盒购自eBioscience公司；免疫组化抗体购自R&D公司；RNase-Free DNase I、TaKaRa SYBR®Premix Ex TaqTM Ⅱ购自天根生化科技有限公司。实验主要仪器有全波段酶标仪、流式细胞仪、荧光定量PCR检测系统；……